西地那非通过上调电压依赖性钾通道抗低氧刺激的人肺动脉平滑肌细胞增殖

发布时间：2024-04-09 04:45

　　目的探讨西地那非抗低氧刺激的人肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的机制与电压依赖性钾通道(voltage-dependent potassium channels,Kv)及环鸟甘酸依赖性蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase,PKG)的关系。方法采用MTT法及细胞免疫荧光法等检测细胞增殖情况;应用膜片钳技术记录低氧刺激PASMCs前后及西地那非或KT-5823干预前后的Kv通道电流,运用Kv1.5抗体透析细胞后的Kv通道电流;应用siRNA干扰技术沉默Kv1.5基因。结果低氧下西地那非组的细胞增殖水平较低氧对照组明显降低;西地那非反转了低氧对细胞K+通道电流,尤其Kv1. 5通道电流的降低作用; si RNA组的Kv1. 5蛋白表达明显减低,沉默Kv1. 5通道基因逆转了西地那非抗低氧刺激的细胞增殖作用; PKG抑制剂KT-5823阻断了西地那非抗低氧刺激的细胞增殖作用,并且反转了西地那非对低氧下的Kv通道电流的上调作用。结论西地那非可通过上调Kv通道亚型主要是Kv1. 5通道,抑...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验细胞株及培养基
    1.2 试剂及仪器
    1.3 细胞培养分组与干预方法
    1.4 实验方法
        1.4.1 DAPI染色法检测细胞增殖
        1.4.2 细胞免疫荧光染色法检测细胞增殖
        1.4.3 MTT法检测细胞增殖
        1.4.4 Western blot法检测siRNA沉默后的Kv1.5表达
        1.4.5 细胞转染与分组
        1.4.6 电生理实验的溶液配制记录Kv通道电流的溶液配方:
        1.4.7 全细胞膜片钳记录
        1.4.8 全细胞K+电流的采集及分析
    1.5 统计学方法
2 结果
    2.1 西地那非抑制低氧刺激的PASMCs增殖MTT结果如Fig 2显示:
    2.2 西地那非翻转了低氧刺激的PASMCs的K+通道电流尤其Kv1.5通道电流的降低
    2.3 沉默Kv1.5基因对Kv1.5蛋白及西地那非抗低氧刺激的细胞增殖的影响
    2.4 PKG抑制剂KT-5823逆转西地那非抗低氧刺激的细胞增殖
    2.5 KT-5823抑制西地那非对低氧下细胞 K+通道电流的上调作用
3 讨论



本文编号：3949337