容积敏感性氯通道通过自噬调节心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制
发布时间：2024-03-26 01:43
在突发性的心血管事件中,及时恢复血流供应是挽救缺血心肌的关键措施,如冠状动脉搭桥术(bypass operation of coronary artery,CABG),心肌梗死溶栓(myocardial infarction thrombolysis)、冠脉痉挛(coronary artery spasm)及心搏骤停行心肺复苏等,但血流恢复过程中,大量伴随的病理事件加重了心肌损伤,即心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。I/R损伤是心血管病中一个重要的病理过程,其机制至今未完全明确,除了炎性反应、钙超载、活性氧(reactive oxygen,ROS)和线粒体功能障碍等有关因素外,同时发现细胞膜离子通道蛋白的功能改变与I/R损伤有关,但目前确切的作用与机制尚不清楚。所以,进一步探讨心肌I/R损伤过程中离子通道的作用和机制,为临床I/R损伤的相关疾病提供新的、有效的治疗策略具有重要价值。自噬(autophagy)是细胞在营养缺乏或应激时降解自身蛋白和受损细胞器并经溶酶体包裹、消化,进行物质再循环利用的一种自我保护方式,在调控细胞损伤、老化和维护细胞内环...
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
第一部分 构建在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 主要试剂配制
2.2 构建在体大鼠缺血/再灌注心肌梗死模型的方案
2.3 实验分组
2.4 心肌酶测定
2.5 TTC心肌组织染色
2.6 心脏超声心功能检测
2.7 统计学方法
3 结果
3.1 缺血/再灌注损伤对大鼠心肌梗死面积的影响
3.2 缺血/再灌注损伤对大鼠心脏功能的影响
3.3 缺血/再灌注对大鼠心肌损伤指标的影响
4 讨论
小结
第二部分DCPIB对心脏缺血/再灌注损伤过程中自噬水平的影响
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 在体心脏缺血/再灌注损伤模型的建立
2.2 实验分组
2.3 心肌组织损伤程度的检测
2.4 心肌自噬水平、相关蛋白及炎性指标的检测
2.5 统计学方法
3 结果
3.1 DCPIB对心脏缺血/再灌注心肌损伤的影响
3.2 DCPIB对心脏缺血/再灌注损伤心肌过程中自噬水平的调控
4 讨论
小结
第三部分 构建模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞的模型
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 实验前液体配制
2.2 原代乳鼠心肌细胞培养和鉴定
2.3 构建模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞方案
2.4 离体缺血/再灌注损伤模型分组
2.5 统计学方法
3 结果
3.1 心肌细胞形态学观察及纯度鉴定
3.2 心肌细胞存活率
4 讨论
小结
第四部分DCPIB对缺血/再灌注损伤心肌细胞自噬的调控及机制
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 试剂配制
2.2 乳鼠心肌细胞培养
2.3 离体心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤模型的建立
2.4 心肌细胞分组
2.5 全细胞膜片钳检测H2O2对心肌细胞VSOR Cl-电流的影响及DCPIB干预
2.6 细胞免疫荧光法检测LAMP2、LC3蛋白在心肌细胞中的表达
2.7 缺血/再灌注对心肌细胞内ROS水平、凋亡和细胞存活率的影响
2.8 蛋白印迹法检测心肌细胞相关自噬蛋白
2.9 RNA提取和RT-PCR
2.10 Beclin1-siRNA对I/R心肌细胞自噬的影响
2.11 统计学方法
3 结果
3.1 DCPIB对H2O2刺激心肌细胞ICl,Vol电流的影响
3.2 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2、LC3水平的影响
3.3 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞Beclin1的mRNA表达的影响
3.4 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞ROS水平的影响
3.5 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响
3.6 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞存活率的影响
3.7 H2O2与DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2和LC3水平的影响
3.8 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2、NF-κB和自噬水平的影响
3.9 Beclin1siRNA对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞自噬水平的影响
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：3939174
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
第一部分 构建在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 主要试剂配制
2.2 构建在体大鼠缺血/再灌注心肌梗死模型的方案
2.3 实验分组
2.4 心肌酶测定
2.5 TTC心肌组织染色
2.6 心脏超声心功能检测
2.7 统计学方法
3 结果
3.1 缺血/再灌注损伤对大鼠心肌梗死面积的影响
3.2 缺血/再灌注损伤对大鼠心脏功能的影响
3.3 缺血/再灌注对大鼠心肌损伤指标的影响
4 讨论
小结
第二部分DCPIB对心脏缺血/再灌注损伤过程中自噬水平的影响
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 在体心脏缺血/再灌注损伤模型的建立
2.2 实验分组
2.3 心肌组织损伤程度的检测
2.4 心肌自噬水平、相关蛋白及炎性指标的检测
2.5 统计学方法
3 结果
3.1 DCPIB对心脏缺血/再灌注心肌损伤的影响
3.2 DCPIB对心脏缺血/再灌注损伤心肌过程中自噬水平的调控
4 讨论
小结
第三部分 构建模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞的模型
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 实验前液体配制
2.2 原代乳鼠心肌细胞培养和鉴定
2.3 构建模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞方案
2.4 离体缺血/再灌注损伤模型分组
2.5 统计学方法
3 结果
3.1 心肌细胞形态学观察及纯度鉴定
3.2 心肌细胞存活率
4 讨论
小结
第四部分DCPIB对缺血/再灌注损伤心肌细胞自噬的调控及机制
1 材料
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂
2 方法
2.1 试剂配制
2.2 乳鼠心肌细胞培养
2.3 离体心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤模型的建立
2.4 心肌细胞分组
2.5 全细胞膜片钳检测H2O2对心肌细胞VSOR Cl-电流的影响及DCPIB干预
2.6 细胞免疫荧光法检测LAMP2、LC3蛋白在心肌细胞中的表达
2.7 缺血/再灌注对心肌细胞内ROS水平、凋亡和细胞存活率的影响
2.8 蛋白印迹法检测心肌细胞相关自噬蛋白
2.9 RNA提取和RT-PCR
2.10 Beclin1-siRNA对I/R心肌细胞自噬的影响
2.11 统计学方法
3 结果
3.1 DCPIB对H2O2刺激心肌细胞ICl,Vol电流的影响
3.2 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2、LC3水平的影响
3.3 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞Beclin1的mRNA表达的影响
3.4 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞ROS水平的影响
3.5 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响
3.6 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞存活率的影响
3.7 H2O2与DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2和LC3水平的影响
3.8 DCPIB对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞LAMP2、NF-κB和自噬水平的影响
3.9 Beclin1siRNA对模拟缺血/再灌注损伤心肌细胞自噬水平的影响
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：3939174
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/3939174.html