FBXW7通过RhoA/Rho激酶信号通路调控糖尿病心肌病发生发展的机制研究

发布时间：2024-02-26 19:48

　　研究目的近年来,世界上糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率急剧上升,DM对人类的生命健康造成了严重威胁,其中引起糖尿病患者死亡的主要原因之一是心血管并发症。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并发症中公认的一种独立、特异的心肌病,与糖尿病患者发生心力衰竭和死亡率升高紧密相关。心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)又是DCM的主要病理改变之一,心肌成纤维细胞的过度增殖以及基质蛋白和胶原纤维大量合成是导致MF的主要原因。本课题通过检测1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)大鼠心肌组织中F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein7,FBXW7)和Rho A/Rho激酶信号通路的变化,并通过慢病毒转染人心肌成纤维细胞(Human cardiac fibroblast,HCFB),进一步测定在高糖培养的HCFB细胞中干预FBXW7表达对Rho A/Rho激酶信号通路的影响,明确FBXW7通过Rho A/Rho激酶信号通路调控M...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
研究生导师及课题指导小组成员介绍
主要符号表
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 糖尿病心肌病
    1.2 心肌纤维化
    1.3 氧化应激
    1.4 RhoA/Rho激酶信号通路在DM大鼠心肌损伤中的研究进展
    1.5 FBXW7的研究进展
    1.6 本课题研究目的和意义
第二章 FBXW7及RhoA/Rho激酶信号通路在DCM中的变化
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 试剂
        2.1.3 主要试剂配制
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物模型的建立
        2.2.2 血糖监测
        2.2.3 心肌标本采集及保存
        2.2.4 苏木素-伊红(HE)染色法
        2.2.5 Masson三色染色法
        2.2.6 碱水解法法检测心肌组织中羟脯氨酸(HYP)含量
        2.2.7 Elisa法检测血清中FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.2.8 血清中SOD和MDA含量测定
        2.2.9 免疫组织化学法(IHC)
        2.2.10 Western blotting(WB)
        2.2.11 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 糖尿病大鼠模型建立状况
        2.3.2 糖尿病大鼠体重、心脏各指标及FBG水平的测定结果
        2.3.3 糖尿病大鼠心肌组织的HE染色结果
        2.3.4 糖尿病大鼠心肌组织的Masson染色结果
        2.3.5 糖尿病大鼠心肌组织的胶原含量
        2.3.6 糖尿病大鼠血清中的FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.3.7 糖尿病大鼠血清中的SOD活力和MDA含量
        2.3.8 糖尿病大鼠心肌组织的免疫组化结果
        2.3.9 糖尿病大鼠心肌组织中FBXW7、RhoA及 ROCK1 蛋白表达量变化
    2.4 讨论
第三章 FBXW7调控RhoA/Rho激酶信号通路对糖尿病心肌纤维化的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 基因干扰序列
        3.1.3 试剂及材料
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养及分组
        3.2.2 建立稳定转染过表达或干扰FBXW7 细胞株
        3.2.3 qRT-PCR检测细胞内FBXW7、RhoA、ROCK1 mRNA水平
        3.2.4 Western blotting检测细胞内FBXW7、RhoA、ROCK1蛋白表达
        3.2.5 消化法检测细胞内羟脯氨酸(HYP)含量
        3.2.6 Elisa法检测细胞内TGF-β1、CTGF含量
        3.2.7 细胞内SOD、MDA含量的检测
        3.2.8 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 慢病毒转染人心肌成纤维细胞的情况
        3.3.2 干预FBXW7表达对RhoA、ROCK1 mRNA水平的影响
        3.3.3 干预FBXW7表达对RhoA、ROCK1蛋白表达的影响
        3.3.4 干预FBXW7表达对细胞内胶原含量的影响
        3.3.5 干预FBXW7表达对细胞内TGF-β1、CTGF含量的影响
        3.3.6 干预FBXW7表达对细胞内SOD、MDA含量的影响
    3.4 讨论
结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：3911767