IL-9在酒精性肝损伤中的作用及其调控机制研究

发布时间：2024-04-21 12:16

　　酒精性肝损伤(Alcoholic Liver Injury,ALI)是由于长期或过量的酒精摄入导致的肝细胞功能障碍性疾病,是我国常见的肝脏疾病。目前对于ALI的病因普遍接受的观点是,酒精及其在体内的代谢产物使肠道通透性增加,使内毒素/脂多糖(LPS)释放,刺激肝脏巨噬细胞活化,产生大量的促炎细胞因子,从而造成了肝细胞的损伤。我们课题组的前期研究表明,在酒精性肝损伤中肝细胞凋亡广泛发生,抑制肝细胞凋亡是防治肝损伤的重要措施。除戒酒以及保肝药辅助治疗以外,酒精性肝损伤目前尚无有效的治疗方案。因此,进一步研究其发病机制,寻找有效的治疗靶点是亟待解决的科研问题。白细胞介素9(Interleukin-9,IL-9)主要是由Th9细胞产生,尽管IL-9被认为是经典的Th2相关的细胞因子,研究表明IL-9与炎症反应和自身免疫性疾病密切相关,在过去几年受到广泛关注。然而,IL-9在酒精性肝损伤中的作用研究尚无文献报道。本课题通过尾静脉注射腺相关病毒(AAV9)在体过表达IL-9,旨在探究IL-9对酒精性肝损伤巨噬细胞相关的炎症反应以及肝细胞凋亡的影响。在体外实验中我们利用RAW264.7和AML-12...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验细胞
        2.1.3 主要试剂
    2.2 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 酒精性肝损伤动物模型的建立
        2.3.2 小鼠单核细胞RAW264.7 以及小鼠正常肝细胞AML-12 的培养
        2.3.3 Western Blot实验
            2.3.3.1 贴壁细胞总蛋白的提取
            2.3.3.2 制胶及SDS-PAGE电泳
            2.3.3.3 湿转
            2.3.3.4 孵一抗和孵二抗
            2.3.3.5 显影
            2.3.3.6 蛋白条带灰度值的分析
        2.3.4 ELISA分析
        2.3.5 LipofectamineTM2000 瞬时转染si RNA-STAT3 沉默STAT3
        2.3.6 流式细胞术检测AML-12肝细胞凋亡
        2.3.7 TUNEL染色检测细胞凋亡
        2.3.8 统计学分析
3 结果
    3.1 IL-9在酒精性肝损伤中的表达变化
        3.1.1 酒精性肝损伤动物模型的建立
        3.1.2 IL-9在原代肝脏巨噬细胞以及酒精刺激的RAW264.7细胞中的表达变化
    3.2利用尾静脉注射腺相关病毒(AAV9)在体过表达IL-9
        3.2.1 尾静脉注射腺相关病毒(AAV9)
        3.2.2 检测病毒过表达IL-9成功与否
    3.3 IL-9对肝脏损伤的影响
    3.4 IL-9对酒精性肝损伤中炎症反应的影响
        3.4.1 IL-9对酒精性肝损伤动物模型中促炎因子的影响
        3.4.2 IL-9对酒精刺激的RAW264.7细胞促炎因子的影响
    3.5 IL-9对酒精性肝损伤中肝细胞凋亡的影响
        3.5.1 IL-9对酒精性肝损伤动物模型中肝细胞凋亡的影响
        3.5.2 巨噬细胞分泌的IL-9对肝细胞凋亡的影响
    3.6 IL-9抑制酒精诱导的肝细胞凋亡的机制研究
        3.6.1 IL-9/IL-9R与 STAT3 信号通路在酒精性肝损伤肝细胞凋亡中的作用
        3.6.2 沉默STAT3对肝细胞凋亡的影响
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述 巨噬细胞在肝脏疾病中的作用
    参考文献



本文编号：3960850