Netrin-1对大鼠脊髓损伤后神经保护作用及其机制研究

发布时间：2024-03-25 04:06

　　目的:脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种严重的致残性中枢神经系统疾病。由于神经元的不可再生性导致患者会出现不同程度的运动、感觉以及括约肌功能障碍等症状。脊髓损伤常导致患者生活质量明显下降并且高额的医疗费用给患者家庭带来了巨大的经济负担。脊髓损伤通常包括两个病理过程即原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤。原发性损伤是指由直接或间接外力瞬间导致的损伤,继发性损伤是在原发性损伤基础上发生的局部缺血、水肿、氧化应激和炎症等一系列复杂的反应。由于继发性脊髓损伤的这一系列病理过程具有可调控性,这在很大程度上影响患者的预后。因此对继发性脊髓损伤病理过程的调控成为当今脊髓损伤治疗的研究热点之一。自噬(autophagy)是一种广泛存在于真核细胞内的溶酶体依赖性的降解过程。自噬通过双层膜包裹待降解的细胞成分形成自噬泡,自噬泡随后与溶酶体融合成为自噬溶酶体。待降解物质在溶酶体内被各种酶消化和降解,以实现细胞自身的代谢和某些细胞器的更新,这对维持细胞稳态有非常重要作用。研究发现提高脑创伤或脊髓损伤疾病模型中损伤区组织自噬能提高动物预后。例如,自噬能通过抑制大鼠脊髓损伤后细胞凋亡而减少神...

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：大鼠脊髓损伤后损伤区脊髓组织中自噬表达变化的实验研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂盒及仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 建立大鼠脊髓损伤模型
        2.4 标本采集
            2.4.1 Western blot标本采集及制样
            2.4.2 免疫荧光标本采集及切片
        2.5 Western blot法检测
            2.5.1 主要实验试剂的配置
            2.5.2 上样及电泳
        2.6 免疫荧光法检测
        2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 脊髓损伤后不同时间点Beclin-1和LC3的表达变化
            3.1.1 脊髓损伤后不同时间点Beclin-1的表达变化
            3.1.2 脊髓损伤后不同时间点LC3的表达变化
        3.2 脊髓损伤后损伤区组织前角神经元自噬增强
    4 讨论
    5 结论
第二部分：Netrin-1对脊髓损伤大鼠神经保护作用及机制的初步实验研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂盒及仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象、分组以及给药
        2.3 建立大鼠脊髓损伤模型
        2.4 标本采集
        2.5 Western blot法检测
        2.6 免疫荧光法检测
        2.7 TUNEL检测
        2.8 HE染色
        2.9 尼氏染色
        2.10 BBB运动功能评分
        2.11 统计学分析
    3 结果
        3.1 Netrin-1提高了大鼠脊髓损伤后运动功能恢复。
        3.2 Netrin-1减少了大鼠脊髓损伤后前角神经元和脊髓组织丢失
        3.3 Netrin-1激活大鼠脊髓损伤后AMPK/m TOR信号通路
        3.4 Netrin-1提高了大鼠脊髓损伤后前角神经元的自噬
        3.5 Netrin-1抑制了大鼠脊髓损伤后前角神经元的凋亡
    4 讨论
    5 结论
第三部分：Netrin-1对脊髓损伤大鼠神经保护作用机制的进一步实验研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂盒及仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象、分组以及给药
        2.3 建立大鼠脊髓损伤模型
        2.4 标本采集
        2.5 Western blot法检测
        2.6 免疫荧光法检测
        2.7 尼氏染色
        2.8 BBB运动功能评分
        2.9 统计学分析
    3 结果
        3.1 Netrin-1通过激活AMPK/mTOR信号通路促进前角神经元内TFEB核转位
        3.2 Netrin-1提高了大鼠脊髓损伤后前角神经元内溶酶体的生成
        3.3 Netrin-1提高了大鼠脊髓损伤后前角神经元自噬潮
        3.4 Netrin-1抑制了大鼠脊髓损伤后前角神经元的凋亡
        3.5 Netrin-1减少了大鼠脊髓损伤后前角神经元的丢失
        3.6 Netrin-1提高了大鼠脊髓损伤后运动功能恢复
    4 讨论
    5 结论
本文创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3938513