不同时机介入隔日限食对急性脊髓损伤大鼠细胞凋亡和坏死性凋亡的影响

发布时间：2024-02-23 18:06

　　目的:建立钳夹型C5脊髓损伤动物模型,用隔日限食进行干预,通过检测脊髓组织中细胞凋亡和坏死性凋亡相关蛋白的表达情况,初步探索隔日限食对急性脊髓损伤大鼠细胞死亡的影响,为隔日限食促进脊髓损伤恢复的作用机制提供实验依据。方法:采用动脉瘤夹钳夹大鼠单侧C5脊髓,建立钳夹型脊髓损伤模型。术前4周,240只大鼠随机分为术前自由饮食组(pre-AL)(180只)和预先干预组(pre-EODF)(60只),pre-AL组大鼠自由摄食、饮水,pre-EODF组大鼠给予EODF干预。4周后,pre-AL组大鼠再随机分为:假手术组(Sham)、自由饮食组(AL)、立即干预组(post-EODF),每组60只。Sham组和AL组术后自由摄食、饮水,post-EODF组术后立即开始EODF干预,pre-EODF组术后继续EODF干预。EODF是指禁食和自由摄食每隔24小时交替进行,但不限制饮水。分别于术后6小时、12小时、24小时、3天、7天采集各组大鼠受损部位的脊髓组织,用免疫组化法检测脊髓中Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达情况,TUNEL法检测脊髓中的细胞凋亡情况,免疫印迹法检测脊髓中TN...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
中英文缩略语表
引言
    1 研究背景
    2 课题来源
实验研究
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要设备和仪器
        1.3 主要实验试剂
    2 实验方法
        2.1 实验动物分组与干预措施
        2.2 动物造模
            2.2.1 术前准备
            2.2.2 模型制备
            2.2.3 术中和术后护理
        2.3 样本采集
            2.3.1 免疫组化和TUNEL检测的样本采集
            2.3.2 免疫印迹和髓过氧化物酶活性检测的样本采集
        2.4 检测指标
            2.4.1 一般情况观察
            2.4.2 免疫组化法检测大鼠脊髓损伤区Caspase-3、Bax和 Bcl-2 蛋白的表达
            2.4.3 TUNEL法检测大鼠脊髓损伤区的细胞凋亡
            2.4.4 免疫印迹法检测大鼠脊髓损伤区TNF-α、RIPK1和RIPK3 蛋白的表达
            2.4.5 髓过氧化物酶测试盒检测大鼠脊髓损伤区MPO的活性
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 一般情况
        3.2 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区凋亡相关蛋白表达的影响
            3.2.1 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区Bcl-2 蛋白表达的影响
            3.2.2 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区Bax蛋白表达的影响
            3.2.3 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区Caspase-3 蛋白表达的影响
            3.2.4 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响
        3.3 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区坏死性凋亡相关蛋白表达的影响
            3.3.1 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区TNF-α蛋白表达的影响
            3.3.2 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区RIPK1 蛋白表达的影响
            3.3.3 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区RIPK3 蛋白表达的影响
            3.3.4 EODF对急性SCI大鼠脊髓损伤区MPO活性的影响
    4 实验结果小结
讨论
    1 对脊髓损伤的认识
        1.1 脊髓损伤的病因和发病率
        1.2 脊髓损伤的继发性损伤机制
        1.3 脊髓损伤的并发症和慢性继发性疾病
        1.4 脊髓损伤的神经保护策略
            1.4.1 手术减压
            1.4.2 甲基强的松龙
            1.4.3 康复治疗
            1.4.4 基于神经保护和神经再生的其他治疗方法
            1.4.5 脊髓损伤治疗策略小结
    2 对饮食限制的认识
        2.1 饮食限制的分类和作用机制
        2.2 饮食限制对疾病的防治作用
            2.2.1 饮食限制与代谢性疾病
            2.2.2 饮食限制与心血管疾病
            2.2.3 饮食限制与癌症
            2.2.4 饮食限制与退行性神经系统疾病
            2.2.5 饮食限制与创伤性神经系统疾病
    3 细胞死亡与脊髓损伤
        3.1 脊髓损伤中细胞死亡的分类
            3.1.1 脊髓损伤中的细胞凋亡
            3.1.2 脊髓损伤中的坏死性凋亡
        3.2 脊髓损伤中凋亡和坏死性凋亡共同信号通路——TNF/TNFR1 死亡受体通路
            3.2.1 细胞存活、凋亡和坏死性凋亡的共同上游途径和机制
            3.2.2 TNF-α、RIPK1、RIPK3和Caspase-3在TNF/TNFR1 调控途径中的作用
            3.2.3 脊髓损伤中细胞死亡机制小结
    4 脊髓损伤模型与节段的选择
    5 结果讨论
        5.1 EODF对脊髓损伤后细胞凋亡的影响
        5.2 EODF对脊髓损伤后细胞坏死性凋亡的影响
        5.3 讨论总结
结论
本研究的创新点
问题与展望
致谢
参考文献
附件1:文献综述
    参考文献
附件2:在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果



本文编号：3907755