应用微透析检测创伤/失血性休克肠道代谢及其参与肠屏障损伤机制的研究
发布时间：2023-11-04 08:57
目的:肠道被认为是创伤/失血性休克后启动MODS的“中心器官”。理解创伤/失血性休克时肠道损伤的机制有助于在临床上寻找治疗创伤/失血性休克相关肠道功能障碍及MODS的方法。本实验的目的是应用微透析的方法检测创伤/失血性休克对大鼠肠道屏障功能及肠道代谢产物的影响,并探索肠道代谢产物变化与肠道损伤及修复机制之间的可能关系。研究方法:构建大鼠创伤/失血性休克模型。大鼠分为创伤/失血性休克组(THS)及创伤/假休克组(TSS)。THS组大鼠的休克时间为55分钟,休克血压为30mmHg,开腹制造创伤,复苏液体为所抽血液混合2倍体积生理盐水;复苏期为2小时,恢复期为6小时。TSS组仅接受麻醉、开腹及血压监测,无休克及复苏过程。微透析导管放置方式选取大鼠末端回肠的肠腔粘膜侧与肠管浆膜侧,总体灌流时间为10小时,每小时收集灌流后的透析液,分析葡萄糖、乳酸、甘油、丙酮酸、谷氨酸的浓度变化。进行大鼠不同时间点的动脉血气分析及血常规检查以保证模型有效性。通过FITC-Dextran灌胃后荧光分光光度计的方式检测大鼠肠道通透性变化。对大鼠肠道病理标本分别进行HE染色观察肠绒毛结构,计算肠道损伤评分,计数绒毛高...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:肠道微透析代谢产物在创伤/失血性休克大鼠肠屏障功能障碍中的作用和意义
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.2 研究对象和试验方法
2.2.1 创伤/失血性休克大鼠模型的建立
2.2.2 大鼠血气及血色素指标的变化
2.2.3 微透析检测
2.2.4 肠道通透性检测
2.2.5 肠道HE染色及病理
2.2.6 Westernblot检测肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-2含量
2.2.7 RealtimePCR检测肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-2的基因表达
2.2.8 ELISA法测定肠管细胞因子TNF–α、IL-6、IL-1β、IL-4、IL-10和IFN-γ含量
2.2.9 统计分析
3 结果
3.1 创伤/失血性休克大鼠模型效果评价
3.2 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析代谢产物变化
3.2.1 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析代谢产物葡萄糖、乳酸、丙酮酸、甘油的变化趋势
3.2.2 创伤/失血性休克大鼠肠道粘膜侧微透析代谢产物与浆膜侧微透析代谢产物的比较
3.2.3 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析谷氨酸的变化：
3.3 创伤/失血性休克破坏大鼠肠屏障完整性及肠屏障功能:
3.4 创伤/失血性休克使大鼠肠道局部炎症反应增加:
4 讨论
5 结论
第二部分:创伤/失血性休克大鼠的肠道损伤与微透析谷氨酸及谷氨酸代谢调节的关系及机制探索
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.2 研究对象和试验方法
2.2.1 创伤/失血性休克模型建立
2.2.2 血气及血色素指标的变化
2.2.3 肠绒毛结构与肠道粘液层损伤评估
2.2.4 利用高效液相色谱进行血及组织氨基酸检测
2.2.5 Westernblot检测大鼠肠粘膜谷氨酰胺酶含量：
2.2.6 肠粘膜内谷氨酰胺酶活性测定
2.2.7 RealtimePCR检测谷氨酰胺酶mRNA的表达
2.2.8 统计分析
3 结果
3.1 创伤/失血性休克大鼠模型效果评价
3.2 创伤/失血性休克造成大鼠肠道结构损伤、粘液层破坏及屏障功能障碍
3.3 创伤/失血性休克大鼠血浆谷氨酸及谷氨酰胺的浓度变化
3.4 创伤/失血性休克大鼠肠粘膜组织谷氨酸及谷氨酰胺的浓度变化
3.5 创伤/失血性休克大鼠改变大鼠肠粘膜组织谷氨酰胺酶含量、基因表达及谷氨酰胺酶活性
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
本文编号：3859985
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:肠道微透析代谢产物在创伤/失血性休克大鼠肠屏障功能障碍中的作用和意义
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.2 研究对象和试验方法
2.2.1 创伤/失血性休克大鼠模型的建立
2.2.2 大鼠血气及血色素指标的变化
2.2.3 微透析检测
2.2.4 肠道通透性检测
2.2.5 肠道HE染色及病理
2.2.6 Westernblot检测肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-2含量
2.2.7 RealtimePCR检测肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-2的基因表达
2.2.8 ELISA法测定肠管细胞因子TNF–α、IL-6、IL-1β、IL-4、IL-10和IFN-γ含量
2.2.9 统计分析
3 结果
3.1 创伤/失血性休克大鼠模型效果评价
3.2 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析代谢产物变化
3.2.1 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析代谢产物葡萄糖、乳酸、丙酮酸、甘油的变化趋势
3.2.2 创伤/失血性休克大鼠肠道粘膜侧微透析代谢产物与浆膜侧微透析代谢产物的比较
3.2.3 创伤/失血性休克大鼠肠道微透析谷氨酸的变化：
3.3 创伤/失血性休克破坏大鼠肠屏障完整性及肠屏障功能:
3.4 创伤/失血性休克使大鼠肠道局部炎症反应增加:
4 讨论
5 结论
第二部分:创伤/失血性休克大鼠的肠道损伤与微透析谷氨酸及谷氨酸代谢调节的关系及机制探索
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.2 研究对象和试验方法
2.2.1 创伤/失血性休克模型建立
2.2.2 血气及血色素指标的变化
2.2.3 肠绒毛结构与肠道粘液层损伤评估
2.2.4 利用高效液相色谱进行血及组织氨基酸检测
2.2.5 Westernblot检测大鼠肠粘膜谷氨酰胺酶含量：
2.2.6 肠粘膜内谷氨酰胺酶活性测定
2.2.7 RealtimePCR检测谷氨酰胺酶mRNA的表达
2.2.8 统计分析
3 结果
3.1 创伤/失血性休克大鼠模型效果评价
3.2 创伤/失血性休克造成大鼠肠道结构损伤、粘液层破坏及屏障功能障碍
3.3 创伤/失血性休克大鼠血浆谷氨酸及谷氨酰胺的浓度变化
3.4 创伤/失血性休克大鼠肠粘膜组织谷氨酸及谷氨酰胺的浓度变化
3.5 创伤/失血性休克大鼠改变大鼠肠粘膜组织谷氨酰胺酶含量、基因表达及谷氨酰胺酶活性
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
本文编号：3859985
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