hTLR9表达及其介导HPV11免疫识别分子机制的研究

发布时间：2024-03-16 09:36

　　尖锐湿疣是当今流行最广的性传播疾病之一,发病率30.69/10万,而且近年来还有上升的趋势。人乳头瘤病毒(Human Papilloma virus, HPV)11型和6型是其主要的致病因素,占尖锐湿疣病变的95%。近年来,虽然对尖锐湿疣的发病机制和防治方法作了大量的研究,但由于对其发病机制尚不完全清楚,故还没有取得实质性的突破。目前尚无有效的治疗方法能完全清除体内的HPV,所以该病是反复发作,久治不愈。 机体的免疫状态决定了HPV感染的自然史和其所致相关疾病的结局。尖锐湿疣患者免疫功能紊乱,这一点已引起同行的重视。患者机体不能建立有效的免疫反应,是造成HPV持续感染的主要原因。大多数研究认为,摘除患者尖锐湿疣疣体后联用免疫调节剂治疗,可特异性调节抗HPV免疫应答,并明显降低尖锐湿疣复发率。约90%感染HPV患者能自然清除该病毒,但决定HPV清除、持续存在或病损恶变的因素目前尚不明确,因而探讨尖锐湿疣的免疫学发病机制有重要的理论意义和临床意义。 Toll-Like receptors(TLRs)是新型的模式识别受体,与微生物病原体的识别有关,在哺乳动物的天然免疫和获得性免疫应答过程中发...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.pCIneo-hTLR9重组质粒构建策略Fig.1TheconstructionstrategyofcombinantplasmidpCIneo-hTLR9[14,15]

第三军医大学硕士学位论文方法一、构建策略由于人TLR9(hTLR9)基因片段较长[13]，从组织细胞中克隆该基因难于保证其高保真度，因而我们购买其原核表达质粒，用特异性内切酶切下目的基因，入真核表达载体pCIneo，构建hTLR9真核表达载体，并将阳性重组质粒转293....

图2.重组子的Sal单酶切鉴定Fig.2IdentificationthecandidateplasmidwithSalIsingledigestion

白质粒pCIneo的HEK293细胞的纯化蛋白为检测ottle1液和2液与PVDF膜共孵育1min。将PVDF膜与X光片一同放入暗盒内曝光3紧压片盒。后清水漂洗，再定影。结果切鉴定定胶电泳，片段大小与预期的一致(图2)

图3.SalI和NotI双酶切鉴定可疑质粒Fig.3IdentificationthecandidateplasmidwithSalIandNotIdoubledigestion

图3.SalI和NotI双酶切鉴定可疑质粒entificationthecandidateplasmidwithSalIaMarker；1)ProductsdigestionbySalIandNo测序号：No：CX_009213)仪进行，测序....

图6.RT-PCR鉴定Fig.6IdentificationtherecombinantplasmidwithRT-PCR

图5.总RNA抽提产物电泳garosegelelectrophooresisoftotalofRNAefromHEK293withtransfectedhTLR9.r;1).TotalRNAextractionfromtransfected....

本文编号：3929462