整合素α6对hDPSCs增殖和成牙本质向分化的影响

发布时间：2024-02-24 18:42

　　目的:探讨整合素α6(integrin alpha 6)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和成牙本质向分化的影响。方法:采用酶消化法,体外分离并培养hDPSCs,构建整合素α6沉默慢病毒,感染hDPSCs,分为阴性对照组(shMock)和整合素α6沉默组(shITGA6)。采用噻唑蓝(MTT)法及对增殖标志物Ki-67进行免疫荧光染色,检测整合素α6对hDPSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、Western blot检测矿化相关蛋白牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein-1,DMP-1)的表达以及茜素红染色检测整合素α6对hDPSCs成牙本质向分化和矿化的影响。结果:MTT结果显示,沉默组hDPSCs的增殖能力明显降低(P<0.01);Ki-67免疫荧光染色结果显示,沉默组Ki-67阳性细胞率明显低于阴性对照组(P<0.001)。碱性磷酸酶染色结果显示,沉默组A...

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

图1荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达评估ITGA6沉默慢病毒感染hDPSCs的感染效率(×100)

沉默组在各时间点的A值均小于阴性对照组,且差异具有统计学意义(Day1:P=0.0079;Day3:P=0.00037;Day5:P=0.00080;Day7:P=0.00061),表明整合素α6促进hDPSCs的增殖(图3)。图2Westernblot检测ITGA6的表达

图2Westernblot检测ITGA6的表达

图1荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达评估ITGA6沉默慢病毒感染hDPSCs的感染效率(×100)图3阴性对照组和沉默组的细胞增殖

图3阴性对照组和沉默组的细胞增殖

图2Westernblot检测ITGA6的表达2.2.2Ki-67免疫荧光染色

图4Ki-67免疫荧光染色

矿化诱导14d后,与阴性对照组(shMock)相比,沉默组(shITGA6)的矿化诱导相关蛋白DSPP、DMP-1的表达量明显上调(P<0.05,图6),提示整合素α6抑制hDPSCs的成牙本质向分化。DSPP:shMock组:1.108±0.087;shITGA6组:1.90....

本文编号：3909450