牙龈卟啉单胞菌蛋白酶Ltp1的表达、纯化及酶学性质研究

发布时间：2024-02-04 16:14

　　采用重组法构建Ltp1的原核表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3)中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导过表达,然后用镍柱层析法粗纯化,分子筛细纯化得到目的蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达产物;将目的蛋白和底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。SDS-PAGE结果显示有与目的蛋白理论相对分子质量一致的表达条带;Western blot分析证实该蛋白带有6个组氨酸(His)标签的目的蛋白,能够催化磷酸单酯的活性;计算出米氏常数(Km)和最大反应速率(Vmax)分别为70.4μmol、51.1μmol/(L·min),pH 5.0～6.0催化活性最高,在37～50℃具有较高活性。

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【部分图文】：

图8pH检测

图7酶活反应图9温度检测

图9温度检测

图8pH检测2.5酶活结果

图1p29-PG1641菌液PCR后DNA琼脂糖电泳

图1为琼脂糖电泳结果:从NCBI上得知PG1641目的基因为513bp,琼脂糖电泳结果与目的基因大小基本一致,在500多bp左右;图2显示,质粒回收后琼脂糖电泳结果也与实际结果一致。图3以生物学信息软件ExPAsy软件生物学信息软件分析知Ltp1蛋白PI值约为4.99,理论相对....

图2质粒回收后琼脂糖电泳

图1p29-PG1641菌液PCR后DNA琼脂糖电泳图3ExPASy软件分析结果

本文编号：3895497