涎腺腺样囊性癌来源外泌体促进成纤维细胞PD-L1表达

发布时间：2023-11-27 20:51

　　目的:研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)来源的外泌体(exosome,EXO)对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法:通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型;使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育,以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取;将EXO与HPLF细胞共孵育后,全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因,GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路;使用qPCR、Western blotting和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果:SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF细胞内吞摄取;EXO处理HPLF细胞后,细胞中PD-L1分子显著上调表达(Fold change=10.19),差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反应信号通路;体外实验证明EXO可以从mR...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 细胞培养与EXO分离和荧光标记
    1.3 SACC-83来源EXO的电镜鉴定
    1.4 共聚焦荧光显微镜观察HPLF细胞对EXO摄取
    1.5 EXO处理后HPLF细胞的全转录组测序与数据分析
    1.6 qPCR检测EXO处理后HPLF细胞中PD-L1mRNA和LAG3mRNA的表达水平
    1.7 Western blotting检测EXO处理后HPLF细胞中相关蛋白的表达水平
    1.8 流式细胞术检测EXO处理后HPLF细胞PD-L1表达水平
    1.9 统计学处理
2 结果
    2.1 SACC-83来源的EXO能够被成纤维细胞HPLF内吞
    2.2 SACC-83来源的EXO对成纤维细胞HPLF生物学功能和相关信号通路的影响
    2.3 SACC-83来源的EXO上调HPLF细胞中PD-L1的表达
3 讨论



本文编号：3868553