抗A型肉毒神经毒素中和抗体间接ELISA的建立

发布时间：2024-05-07 23:59

　　目的建立间接ELISA,检测血清中抗A型肉毒神经毒素(botulinum neurotoxin type A, BoNT-A)中和抗体。方法以纯化的BoNT-A作为包被抗原,抗BoNT-A兔血清作为一抗,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)作为二抗,结合实验设计,建立检测血清中抗BoNT-A中和抗体的间接ELISA,验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,并与经典动物中和试验法检测抗BoNT-A中和抗体的结果进行比较。结果①间接ELISA条件的建立与优化,使用2.50μg/mL纯化的BoNT-A抗原包被,4℃过夜;1%明胶作为封闭剂,37℃封闭2 h;确定一抗优化条件:反应条件为1∶5 000稀释,37℃孵育90 min;二抗优化条件:反应条件为1∶10 000稀释,37℃孵育90 min;加入底物37℃显色10 min,加终止液终止后,用酶标仪测定A_{450 nm}值;②经过验证该方法特异性好,所包被抗原与抗伤寒杆菌兔血清、抗破伤风毒素兔血清、抗B型...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂及仪器
    1.4 间接ELISA最佳工作条件的确立
        1.4.1 抗原包被浓度和一抗工作浓度的确定
        1.4.2 二抗最佳工作浓度的确立
    1.5 间接ELISA的优化
        1.5.1 血清稀释液的优化
        1.5.2 抗原包被及封闭条件的优化
        1.5.3 一抗工作条件的优化
        1.5.4 二抗工作条件的优化
        1.5.5 显色时间的优化
        1.5.6 间接ELISA的初步确立
    1.6 方法的验证
        1.6.1 特异性验证
        1.6.2 灵敏度验证
        1.6.3 重复性验证
    1.7 间接ELISA与动物中和试验法比较
        1.7.1 动物中和试验法标定抗BoNT-A兔血清效价
        1.7.2 间接ELISA测定兔血清效价
        1.7.3 动物中和试验法与间接ELISA比较
    1.8 统计学分析
2 结 果
    2.1 间接ELISA最佳工作条件的确立
        2.1.1 抗原包被浓度和一抗工作浓度的确定
        2.1.2 二抗最佳工作浓度
    2.2 间接ELISA的优化
        2.2.1 血清稀释液的优化
        2.2.2 抗原包被及封闭条件的优化
        2.2.3 一抗工作条件的优化
        2.2.4 二抗工作条件的优化
        2.2.5 显色时间的优化
    2.3 方法的验证
        2.3.1 特异性验证
        2.3.2 灵敏度验证
        2.3.3 批内重复性验证
        2.3.4 批间重复性验证
    2.4 建立的间接ELISA与动物中和试验法的比较
3 讨 论



本文编号：3967190