CHO细胞表达抗血管内皮生长因子单克隆抗体工艺优化

发布时间：2024-04-26 03:05

　　抗血管内皮生长因子单克隆抗体(VEGF-MA)能够抑制肿瘤生长,具有良好的市场前景。本研究利用一株重组中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)细胞株表达VEGF-MA。首先对培养基种类进行优化,筛选最优的基础培养基、补料培养基和外源添加物。研究结果表明:最有利于重组CHO细胞株表达VEGF-MA的基础培养基、补料培养基和外源添加物分别为ActiCHO P Powder CD、CD Efficient Feed C AG和Sheff-CHO Plus PF ACF。利用这一培养基配比在摇瓶和3 L发酵罐中培养重组CHO细胞,VEGF-MA产量均可达到3. 20 g/L。在3L发酵罐中进一步优化培养条件,结果表明:最优的接种密度、pH、溶解氧浓度、前期培养温度和后期培养温度分别为1. 0×10⁶个/mL、7. 10、40%、36. 5℃和34℃,此时的VEGF-MA产量能够达到4. 10 g/L。VEGFMA质量指标均处于标准范围内:电荷异质性、糖基化水平和蛋白纯度分别为26. 1%、59. 1%和95. 1%。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞株
    1.2 培养基
    1.3 细胞培养
        1.3.1 细胞复苏及摇瓶扩增
        1.3.2 摇瓶培养
        1.3.3 3 L发酵罐培养
    1.4 检测方法
        1.4.1 VEGF-MA浓度检测
        1.4.2 VEGF-MA纯化
        1.4.3 糖基化水平检测
        1.4.4 蛋白纯度检测
        1.4.5 电荷异质性检测
2 结果与讨论
    2.1 培养基优化
        2.1.1 基础培养基优化
        2.1.2 补料培养基优化
        2.1.3 外源添加物优化
    2.2 3 L发酵罐培养条件优化
        2.2.1 接种密度优化
        2.2.2 pH优化
        2.2.3 DO优化
        2.2.4 前期培养温度优化
        2.2.5 后期培养温度优化
3 结论



本文编号：3964613