脐带间充质干细胞来源的条件培养基对退变椎间盘髓核来源干/祖细胞再生能力的影响

发布时间：2023-06-10 11:05

　　目的:越来越多的证据表明植入间充质干细胞(MSCs)的治疗作用不是干细胞本身而是其分泌的营养因子和细胞因子介导的。本文从退变髓核和脐带组织中高效分离培养出MSCs,并对细胞的生物学特征进行鉴定和比较。进一步从细胞外形、细胞表型、细胞增殖能力、三系分化潜能、细胞多能性及髓核特别标志基因表达等方面去评估人脐带间充质干细胞来源的条件培养基(UCMSCs-CM)对退变椎间盘髓核干细胞/祖细胞(D-NPMSCs)再生能力的影响。方法:采用酶解组织块法分离提纯人退变椎间盘髓核来源的细胞,采用组织块贴壁法分离提纯人脐带间充质干细胞(UCMSCs),然后进行贴壁扩增培养至P3代并观察细胞的形态学特征。采用流式细胞术验证细胞MSC表面标志物的特征,比较分析MSC表面标志物的阳性细胞率,并对它们进行三系分化能力鉴定及比较。收集UCMSCs的条件培养基体外作用D-NPMSCs,观察D-NPMSCs的形态学变化。进一步采用流式细胞术检测MSCs和NP细胞的表面特异性标志物、以及细胞凋亡和细胞周期的表达。通过生长曲线分析、CCK8和EdU评估D-NPMSCs细胞活力和增殖能力。通过特异的细胞化学染色法测定D-N...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.椎间盘结构
    2.椎间盘退变及病因
    3.椎间盘退变的治疗策略
    4.基于UCMSCs治疗的旁分泌机制
    5.本课题的研究思路
第二章 退变椎间盘组织髓核干/祖细胞与脐带来源间充质干细胞生物学特性的比较
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 实验样本
        2.2 实验试剂
        2.3 实验仪器及耗材
        2.4 试剂配制
    3.实验方法
        3.1 间充质干细胞的分离与培养
        3.2 细胞形态学观察
        3.3 流式细胞术检测细胞表面抗原分子的表达
        3.4 间充质干细胞向成骨、成脂、成软骨分化
        3.5 间充质干细胞的冻存与复苏
    4.数据分析
    5.实验结果
        5.1 D-NPMSCs和UCMSCs的形态学观察比较
        5.2 流式细胞术检测D-NPMSCs与UCMSCs细胞表面标志物及差异比较
        5.3 D-NPMSCs与UCMSCs向成骨、成脂、成软骨多向分化潜能比较
    6.讨论
    7.小结
第三章 UCMSCs-CM对退变椎间盘髓核来源干/祖细胞再生能力的影响
    1.引言
    2.实验材料
        2.1 实验试剂
        2.2 主要实验仪器及耗材
        2.3 引物序列
    3.实验方法
        3.1 脐带间充质干细胞条件培养基的收集
        3.2 脐带间充质干细胞条件培养基作用浓度的筛选
        3.3 CM作用后D-NPMSCs的形态学观察
        3.4 流式细胞术评估CM作用后D-NPMSCs的表面抗原的表达
        3.5 CCK8法检测CM作用后D-NPMSCs的细胞活性
        3.6 生长曲线评估CM作用后D-NPMSCs的生长趋势
        3.7 EdU实验评估CM作用后D-NPMSCs的增殖能力
        3.8 流式细胞术检测CM作用后D-NPMSCs的细胞周期变化
        3.9 流式细胞术检测CM作用后D-NPMSCs的细胞凋亡变化
        3.10 细胞特异性化学染色评估CM作用后D-NPMSCs的多向分化潜能
        3.11 qRT-PCR检测CM作用后D-NPMSCs相关基因的表达
        3.12 western blot检测ERK蛋白的变化
    4.数据分析
    5.实验结果
        5.1 UCMSCs-CM作用浓度结果分析
        5.2 UCMSCs-CM作用后D-NPMSCs的形态学变化
        5.3 UCMSCs-CM上调了D-NPMSCs的MSC表面抗原的表达
        5.4 UCMSCs-CM促进了D-NPMSCs的增殖能力
        5.5 UCMSCs-CM改善了D-NPMSCs的多向分化潜能
        5.6 UCMSCs-CM提高了D-NPMSCs的多能干细胞基因的表达
        5.7 UCMSCs-CM改变了NP相关的特别标志物的表达
        5.8 UCMSCs-CM抑制了ERK的磷酸化
    6.讨论
    7.小结
全文总结
    1.文中主要小结
        1.1 人退变椎间盘组织髓核干/祖细胞与脐带来源间充质干细胞生物学特性的比较
        1.2 UCMSCs-CM对退变椎间盘髓核来源干/祖细胞的再生能力的影响
    2.本课题的特色和创新
    3.实验欠缺与不足
参考文献
中英文缩写词
在校期间发表论文
致谢



本文编号：3832767