Wnt在宫颈癌发生发展中作用及表达调控机制的研究

发布时间：2017-03-20 23:00

  本文关键词：Wnt在宫颈癌发生发展中作用及表达调控机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的宫颈癌是严重威胁妇女生命安全的头号恶性肿瘤,发病率较高,且呈逐年上升和低龄化趋势。宫颈癌发病是一个缓慢的过程,从正常宫颈组织发展为宫颈上皮内瘤样病变,再到宫颈癌需要数十年时间,早期诊断、早期治疗是改善宫颈癌治疗效果、生活质量及死亡率的主要策略,也是降低宫颈癌死亡率的关键所在。在癌细胞调控及调节中会涉及多个信号通路,如Hedgehog、Notch和Wnt等。Wnt是一类发育相关的保守信号通路,对于平衡组织发育后的各个系统均具有重要功能。Wnt信号通路对于宫颈癌细胞的自我更新和分化的调控作用也会扮演重要角色。因此探究Wnt在宫颈癌发生发展中表达作用,同时研究Wnt上下游信号通路的传导变化,对于宫颈癌的发生发展甚至转移都有非常重要的作用,明确Wnt在宫颈癌发生发展中的作用机制,将为宫颈癌临床治疗提供治疗靶点及治疗策略提供理论依据。方法采用免疫组化方法检测不同宫颈组织中Wnt-3a及β-catenin蛋白表达,测定Wnt-3a阳性表达率和β-catenin蛋白异常表达率,并分析其与宫颈癌临床分期和病理分级的相关性;其次采用RT-PCR测定四种人宫颈癌细胞Hela、C33A、Siha、Caski细胞中Wnt-3和β-catenin m RNA表达情况,四种宫颈癌细胞中均可见Wnt-3和β-catenin m RNA表达,除C33A细胞中表达略低外,三种宫颈癌细胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-catenin m RNA表达均超过相对表达量1.0以上,提示Wnt-3和β-catenin在宫颈癌细胞表达较高,这与人宫颈癌组织中免疫组化检查结果一致。为了分析Wnt变化以及下游级联通路的变化,将不同宫颈组织放入液氮研磨,进行免疫印迹分析,分析不同宫颈组织中p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表达水平。结果1)正常宫颈组织中几乎不表达Wnt-3a,Wnt-3a阳性表达定位于细胞浆中,宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞癌组织中可见细胞浆中表达的Wnt-3a蛋白黄色阳性表达,Wnt-3a阳性表达率不是很高。正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞癌组织中的Wnt-3a阳性表达率分别为10%(2/20)、35.0%(7/20)及50.0%(15/30)。正常宫颈组织中,β-catenin蛋白呈连续细胞膜表达,其表达为棕黄色,主要分布在棘层与上皮基底层细胞膜上,细胞浆无着色;宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞癌组织中,细胞膜上β-catenin蛋白表达呈现不同程度缺失,甚至不表达,β-catenin异常表达主要集中于细胞浆及细胞核中。正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞癌组织中的β-catenin异常表达率分别为15.00%(3/20)、50.00%(10/20)及80.00%(24/30)。在30例宫颈癌标本中,按FIGO标准分期,16例I期,8例II期,6例III期,Wnt-3a阳性表达率分别为43.75%(7/16)、50.00%(4/8)及66.67%(4/6),三组间比较和两组间比较均不具显著性差异,p0.05;β-catenin异常表达率分别为68.75%(11/16)、87.50%(7/8)及100.00%(6/6),可见随着临床分期的升高,β-catenin阳性表达逐渐升高,但三组间比较和两组间比较均不具显著性差异,p0.05。按病理分级11例G1级,14例G2级,5例G3级,Wnt-3a阳性表达率分别为45.45%(5/11)、42.86%(6/14)及80.00%(4/5),三组间比较和两组间比较均不具显著性差异,p0.05;β-catenin阳性表达率分别为63.64%(7/11)、85.71%(12/14)及100.00%(5/5),可见随着宫颈癌病理分级的升高,β-catenin异常表达逐渐升高,但三组间比较和两组间比较均不具显著性差异,p0.05。2)四种宫颈癌细胞中均可见Wnt-3和β-catenin m RNA表达,除C33A细胞中表达略低外,三种宫颈癌细胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-catenin m RNA表达均超过相对表达量1.0以上,提示Wnt-3和β-catenin在宫颈癌细胞表达较高,这与人宫颈癌组织中免疫组化检查结果一致。3)宫颈鳞癌组织中p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表达显著高于正常宫颈上皮组织和宫颈上皮内瘤样病变组织,而宫颈上皮内瘤样病变组织p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表达则显著高于正常宫颈上皮组织。结论研究结果表明Wnt信号通路表达的激活及β-catenin的异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关,可以作为早期诊断宫颈癌的附加指标,而且Wnt活化和β-catenin异常表达可能与m TOR-STAT3信号通路的变化相关,以m TOR-STAT3信号通路为关键靶点调控Wnt活化和β-catenin异常表达,可以为宫颈癌治疗、预防转移等临床治疗提供治疗靶点和治疗措施。
【关键词】：宫颈癌 Wnt β-catenin mTOR STAT3
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 实验方法13-26
• 1 实验材料13-19
• 1.1 组织样本13
• 1.2 试剂13-15
• 1.3 仪器15-16
• 1.4 主要试剂的配制16-19
• 2 实验方法19-26
• 2.1 细胞复苏19
• 2.2 细胞培养19
• 2.3 细胞及病理标本蛋白及RNA提取19-21
• 2.4 蛋白印迹分析21-23
• 2.5 实时荧光定量PCR检测23-25
• 2.6 数据处理25-26
• 第三章 结果26-31
• 3.1 不同宫颈组织中Wnt-3a及 β-catenin蛋白表达26-28
• 3.2 宫颈癌细胞中Wnt-3a和 β-catenin mRNA表达分析28-29
• 3.3 不同宫颈组织中信号转导途径变化29-31
• 第四章 讨论31-35
• 参考文献35-40
• 综述40-46
• 参考文献43-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 成夏炫;史丽云;张航;;Wnt信号通路与肿瘤药物治疗研究进展[J];健康研究;2011年06期

  本文关键词：Wnt在宫颈癌发生发展中作用及表达调控机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：258566