超声破坏微泡介导内皮抑素基因治疗肝癌及其机制研究

发布时间：2023-08-15 20:26

　　第一部分携内皮抑素脂质基因超声微泡的制备 第一节重组人内皮抑素质粒载体的构建、纯化及鉴定 目的构建重组人内皮抑素真核表达载体并制备脂质超声微泡携带目的基因。方法根据目的基因片段设计引物，通过聚合酶链式反应(PCR)进行扩增并纯化，然后将纯化的目的基因与pEZ-M46载体分别酶切并进行连接，构建内皮抑素基因重组真核表达载体pEZ-M46-ES，并转化至大肠肝菌，进行菌落PCR、酶切分析和DNA测序鉴定重组克隆。结果经双酶切电泳和DNA测序分析证实，重组克隆载体内的目的基因片段序列与GENEBANK上报道的Endostatin基因序列基本一致，编码蛋白质的氨基酸序列完全相同。结论成功构建了人重组内皮抑素基因质粒载体。 第二节微泡基因载体的制备及基本特性检测 目的研制性能稳定、高效的微泡类基因载体以携带目的基因。方法采用成膜水化法、膜挤压法和机械振荡法分别制备脂质超声微泡和纳米脂质体，通过生物素-亲和素法将微泡-纳米脂质体连接起来，以构建载基因量高的微泡类载体；在配方中加入带正电荷的成膜材料DC-胆固醇(DC-cholesterol)，通过机械振荡法制备阳离子脂质超声微泡，光镜下观察微泡形态...

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
    参考文献
第一部分 携内皮抑素基因超声微泡的制备
    第一节 重组人内皮抑素质粒载体的构建、纯化及鉴定
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 附图
    第二节 微泡基因载体的制备及基本特性检测
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 附图
第二部分 超声破坏微泡介导内皮抑素基因转染细胞实验
    第一节 超声破坏微泡介导内皮抑素基因转染对脐静脉内皮细胞生长及血管生成的影响
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 附图
    第二节 超声破坏微泡介导内皮抑素基因转染对肝癌 HepG2 细胞侵袭、转移特性的影响
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 附图
第三部分 超声破坏微泡介导内皮抑素基因对肝癌 H22 移植瘤生长的影响
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
    4 参考文献
    5 附图
全文总结
文献综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文、参研项目及学术交流情况



本文编号：3842219