8-iso-PGF2a试剂盒的制备及在新生儿HIE病情评估中的应用

发布时间：2024-03-05 04:11

　　目的:制备和鉴定抗8-异前列腺素(8-iso-prostaglandin F 2alpha,8-iso-PGF2α)单克隆抗体;制备8-iso-PGF2α测定试剂盒(ELISA);应用该试剂盒测定缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生儿尿8-iso-PGF2α水平。 方法:利用碳二亚胺法(EDC)连接半抗原8-iso-PGF2α和载体蛋白BSA/OVA,免疫BALB/C小鼠,将免疫成功的小鼠脾细胞与SP2/O融合后利用间接ELISA筛选出阳性克隆并扩大培养,阳性克隆制备腹水后进行提纯。应用辣根过氧化物酶标记8-iso-PGF2α,制备ELISA法测定试剂盒,并测定126例正常新生儿和151例HIE患儿尿8-iso-PGF2α含量。 结果:获得一株稳持续定分泌抗8-iso-PGF2α单克隆抗体的细胞株。ELISA试剂盒中的8-iso-PGF2α抗体包被浓度为1μg/ml,温育时间为30分钟,Cutoff值为0.14+NC,所需样本量为100μl,试剂盒37℃放置7天OD₄₅₀值无明显变化。正常新生...

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【学位级别】：硕士

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英文摘要
第一章 前言
    1.1 研究意义
    1.2 8-iso-PGF2α的代谢及生物学特性
    1.3 8-iso-PGF2α的测定方法
    1.4 8-iso-PGF2α测定的临床意义
        1.4.1 心血管系统疾病
        1.4.2 神经系统疾病
        1.4.3 呼吸系统疾病
        1.4.4 其它系统疾病
    1.5 单克隆抗体
    1.6 杂交瘤技术的概念与分类
    1.7 单克隆抗体的概念及特性
    1.8 本试验中抗原的特殊性
第二章 8-iso-PGF2α多克隆抗体的制备
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要材料及试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要缓冲液及其配制
    2.2 方法
        2.2.1 抗原的制备
        2.2.2 免疫小鼠
        2.2.3 试血和采血
        2.2.4 抗血清的保存
    2.3 结果与讨论
    2.4 小结
第三章 细胞融合
    3.1 细胞融合技术
    3.2 HAT选择性培养
    3.3 主要器材
    3.4 主要设备
    3.5 主要试剂
    3.6 主要试剂的配制
    3.7 试验方法
        3.7.1 饲养细胞的制备
            3.7.1.1 器材和试剂
            3.7.1.2 操作方法
        3.7.2 细胞融合
            3.7.2.1 器材和试剂
            3.7.2.2 操作方法
    3.8 结果与讨论
    3.9 小结
第四章 8-iso-PGF2α单克隆抗体的筛选和检测
    4.1 免疫酶技术
        4.1.1 原理
        4.1.2 器材和试剂
        4.1.3 实验方法
    4.2 冻存阳性克隆
    4.3 有限稀释法克隆化
    4.4 结果与讨论
    4.5 小结
第五章 腹水型单克隆抗体的生产与纯化
    5.1 腹水的制备
        5.1.1 器材与试剂
        5.1.2 方法
    5.2 腹水型单克隆抗体的纯化
        5.2.1 腹水的预处理
        5.2.2 硫酸铵盐法初提单克隆抗体
    5.3 结果与讨论
    5.4 小结
第六章 8-iso-PGF2α测定试剂盒(ELISA)的制备
    6.1 前言
    6.2 原理及用途
    6.3 材料与方法
    6.4 试剂组成
    6.5 试剂参数确定
    6.6 试剂盒使用方法
    6.7 讨论
第七章 8-iso-PGF2α在新生儿HIE病情评估中的价值
    7.1 研究背景
    7.2 对象与方法
        7.2.1 临床资料
        7.2.2 研究方法
    7.3 结果
        7.3.1 正常与HIE患儿尿8-iso-PGF2α水平
        7.3.2 尿8-iso-PGF2α评估新生儿HIE病情的准确性
    7.4 讨论
参考文献
在校期间发表的论文
致谢



本文编号：3919662