3种TLR配体对猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗佐剂活性的比较

发布时间：2024-04-23 23:39

　　为比较3种TLR配体对猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)疫苗的佐剂活性,本研究利用重组大肠杆菌表达脑膜炎奈瑟菌Ag473脂蛋白、创伤弧菌FlaB鞭毛蛋白和结核分枝杆菌热应激蛋白70(Hsp70),采用镍亲和柱纯化获得该3种重组蛋白;分别将相同剂量(10μg)3种重组蛋白、ISA206佐剂(100μL)和不完全弗氏佐剂(FIA)(100μL)与PCV2 VLP疫苗(50μg)混合,肌肉注射免疫小鼠,初免后14 d加强免疫1次;初免后每周采血分离血清,采用ELISA检测抗原特异抗体;加强免疫后14 d利用PCV2攻毒,攻毒后7 d和14 d采血分离血清,采用荧光定量PCR检测病毒DNA拷贝数;攻毒后14 d迫杀小鼠,制备并培养其脾细胞,经PCV2 VLP疫苗刺激后,采用试剂盒检测细胞因子的表达。SDS-PAGE分析结果显示,3种TLR配体在重组大肠杆菌中均获得正确表达,纯化重组蛋白的纯度大于90%。从初免14 d起,3个分子佐剂组中Ag473佐剂组的PCV2抗体水平最高,但低于ISA206佐剂组却高于FIA组,差异不显著(p>0.05)。在PCV2攻毒前,3个分子佐剂组中...

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【部分图文】：

图13种纯化融合蛋白的SDS-PAGE分析

各重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白，SDS-PAGE分析显示，pET-Hsp70/E.coli重组菌表达了31kuHis-Hsp70融合蛋白，表达产物为包涵体；pET-FlaB/E.coli重组菌表达了32kuHis-FlaB融合蛋白，表达产物为可溶性蛋白；pELK-Ag....

图2免疫小鼠的Cap蛋白特异抗体检测

采集小鼠首免后第7d、14d、21d、28d血清，ELISA检测Cap蛋白特异抗体水平，结果显示从首免后7d起，各免疫组小鼠均为PCV2Cap蛋白特异抗体检测阳性（P/N≥2.1），抗体水平随免疫时间延长呈明显的上升趋势，28d各组小鼠抗体水平达到最高值；其中Ag4....

图4免疫小鼠脾细胞的IFN-γ表达检测

图3免疫小鼠脾细胞的TNF-α表达检测图5免疫小鼠脾细胞的IL-4表达检测

图3免疫小鼠脾细胞的TNF-α表达检测

免疫小鼠脾细胞经ConA或ELP-VLP刺激后72h，利用ELISA检测细胞培养上清中各细胞因子浓度。结果显示，与未免疫对照组相比，5个免疫组的TNF-α、IFN-γ表达水平显著升高（p<0.05），且ELP-VLP刺激组高于ConA刺激组。在3种分子佐剂中，Ag473佐剂组的....

本文编号：3962924