鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析

发布时间：2024-04-22 04:10

　　应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱导表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别。序列分析表明,该毒株与其他鹅源星状病毒参考毒株的核苷酸相似性介于37.8%～99.3%之间,HLJ-1801分离株与已发表的8株鹅源星状病毒毒株位于同一分支,表明其属于一种新型星状病毒成员。利用原核表达系统成功高效地表达了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在。本试验成功获得了纯化的ORF2重组蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗体,为进一步研究ORF2蛋白对星状病毒感染的诊断试剂的研发奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 ORF2基因的扩增
        1.2.3 ORF2基因遗传进化分析
        1.2.4 重组质粒pET32a-ORF2的构建
        1.2.5 ORF2蛋白的诱导表达及鉴定
        1.2.6 大肠埃希菌ORF2蛋白多克隆抗体制备
        1.2.7 多克隆抗体效价检测及免疫原性鉴定
2 结果与分析
    2.1 ORF2基因扩增产物
    2.2 ORF2基因核苷酸与氨基酸序列相似性分析
    2.3 HLJ01株与参考毒株ORF2基因的遗传进化树分析
    2.4 HLJ01与参考毒株ORF2基因氨基酸序列比对
    2.5 重组表达载体pET32a-ORF2的双酶切鉴定
    2.6 重组蛋白的SDS-PAGE分析
    2.7 Western Blot鉴定
    2.8 多克隆抗体的制备及检测
3 讨论



本文编号：3961908