黄芪多糖及其硫酸化修饰产物体内外抗炎活性研究
发布时间：2024-04-11 19:26
抗生素最开始是作为促生长添加剂使用，能显著促进动物生长，提高饲料报酬，并起到预防疾病的作用。但是伴随着抗生素在动物生产中的长期、不合理使用，越来越多的负面影响也日渐突出，如抗生素耐药性及畜产品中的残留问题等。因此，越来越多的研究开始关注抗生素替代品的开发。黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides，APS）是中草药黄芪的重要组成成分，具有抗炎和免疫调节等生物学活性，且无残留、毒副作用小。本研究分4个试验，采用体外检测和体内验证相结合的方法，探讨APS的抗炎活性，并系统研究硫酸化修饰对APS抗炎活性的影响，以期为抗生素替代品的研发提供理论依据。 试验一黄芪多糖的体外抗炎活性研究 本试验采用脂多糖（LPS）刺激建立Caco2细胞体外炎症模型，研究添加方式和剂量对APS抗炎效果的影响。APS（0、25、50、100和200μg/mL）和1μg/mL LPS以下述三种方式添加：（1）治疗添加组，先用LPS刺激24h，再用APS孵育24h；（2）预防添加组，先用APS孵育24h，再用LPS刺激24h；（3）同时添加组，将LPS和APS混合后共同孵育细胞48h。用RT-qPCR...
【文章页数】：109 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 黄芪多糖的提取方法
1.1.1 水煮醇沉法
1.1.2 微波辅助提取法
1.1.3 酶解法
1.1.4 超声波法
1.1.5 碱醇法
1.2 黄芪多糖纯化方法
1.3 黄芪多糖的化学组成及结构信息
1.4 黄芪多糖的生物学活性
1.4.1 APS 的抗炎活性
1.4.2 APS 对免疫器官的影响
1.4.3 APS 对免疫细胞的影响
1.4.4 APS 对免疫分子的影响
1.4.5 APS 的抗病毒和抗肿瘤作用
1.4.6 APS 的抗氧化作用
1.5 多糖的结构修饰与构效关系研究进展
1.5.1 硫酸化修饰
1.5.2 磷酸化修饰
1.5.3 乙酰化修饰
1.5.4 硒化修饰
1.5.5 羧甲基化修饰
1.5.6 烷基化修饰
1.6 肠黏膜屏障研究进展
1.7 TLR 信号通路
1.7.1 简介
1.7.2 信号分子
1.7.3 作用
1.8 研究问题的提出及研究内容
1.8.1 研究问题的提出
1.8.2 研究内容
1.8.3 技术路线
第二章 黄芪多糖的体外抗炎活性研究
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 仪器
2.1.3 试剂配置
2.1.4 细胞复苏和培养
2.1.5 APS 的细胞毒性试验
2.1.6 APS 的抗炎试验
2.1.7 Caco2 细胞单层跨膜通透性检测
2.1.8 RT-qPCR 方法测定 mRNA 相对表达量
2.1.9 Western Blot 检测蛋白表达
2.1.10 数据分析
2.2 结果
2.2.1 APS 的细胞毒性试验
2.2.2 治疗添加组 APS 抗炎活性
2.2.3 预防添加组 APS 抗炎活性
2.2.4 同时添加组 APS 抗炎活性
2.2.5 APS 对 LPS 刺激 Caco2 细胞单层 Isc 变化的影响
2.2.6 APS 对 LPS 刺激的 Caco2 细胞紧密连接蛋白表达的影响
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 黄芪多糖的硫酸化修饰及其细胞毒性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 仪器
3.1.3 APS 的硫酸化修饰
3.1.4 结构分析
3.1.5 SAPS 的细胞毒性试验
3.1.6 数据分析
3.2 结果与讨论
3.2.1 SAPS 的紫外光谱
3.2.2 SAPS 的红外光谱
3.2.3 SAPS 的细胞毒性试验
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 硫酸化黄芪多糖的体外抗炎活性研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 仪器
4.1.3 液体配置
4.1.4 SAPS 的抗炎试验
4.1.5 RT-qPCR 方法测定相关基因 mRNA 相对表达量
4.1.6 Western Blot 方法分析相关蛋白表达
4.1.7 统计方法
4.2 结果
4.2.1 SAPS 对 Caco2 细胞炎症因子 mRNA 表达的影响
4.2.2 SAPS 对紧密连接蛋白和 TLR4 mRNA 和蛋白表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 黄芪多糖和硫酸化黄芪多糖对 LPS 刺激肉仔鸡的抗炎及免疫调节活性研究
5.1 材料与方法
5.1.1 试验动物及处理
5.1.2 样品采集和处理
5.1.3 检测指标及方法
5.1.4 统计分析
5.2 试验结果
5.2.1 肉仔鸡生产性能
5.2.2 肉仔鸡免疫器官指数
5.2.3 肉仔鸡血液指标
5.2.4 肉仔鸡外周血淋巴细胞增殖
5.2.5 肉仔鸡外周血淋巴细胞上清液指标
5.2.6 肉仔鸡肠道形态
5.2.7 肉仔鸡肠道免疫细胞
5.2.8 肉仔鸡肠道黏膜炎症因子 mRNA 表达
5.2.9 肉仔鸡肠道黏膜紧密连接蛋白和 TLR4 mRNA 表达
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 总体结论与建议
6.1 本研究的主要结论
6.2 本研究的创新点
6.3 有待进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3951028
【文章页数】：109 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 黄芪多糖的提取方法
1.1.1 水煮醇沉法
1.1.2 微波辅助提取法
1.1.3 酶解法
1.1.4 超声波法
1.1.5 碱醇法
1.2 黄芪多糖纯化方法
1.3 黄芪多糖的化学组成及结构信息
1.4 黄芪多糖的生物学活性
1.4.1 APS 的抗炎活性
1.4.2 APS 对免疫器官的影响
1.4.3 APS 对免疫细胞的影响
1.4.4 APS 对免疫分子的影响
1.4.5 APS 的抗病毒和抗肿瘤作用
1.4.6 APS 的抗氧化作用
1.5 多糖的结构修饰与构效关系研究进展
1.5.1 硫酸化修饰
1.5.2 磷酸化修饰
1.5.3 乙酰化修饰
1.5.4 硒化修饰
1.5.5 羧甲基化修饰
1.5.6 烷基化修饰
1.6 肠黏膜屏障研究进展
1.7 TLR 信号通路
1.7.1 简介
1.7.2 信号分子
1.7.3 作用
1.8 研究问题的提出及研究内容
1.8.1 研究问题的提出
1.8.2 研究内容
1.8.3 技术路线
第二章 黄芪多糖的体外抗炎活性研究
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 仪器
2.1.3 试剂配置
2.1.4 细胞复苏和培养
2.1.5 APS 的细胞毒性试验
2.1.6 APS 的抗炎试验
2.1.7 Caco2 细胞单层跨膜通透性检测
2.1.8 RT-qPCR 方法测定 mRNA 相对表达量
2.1.9 Western Blot 检测蛋白表达
2.1.10 数据分析
2.2 结果
2.2.1 APS 的细胞毒性试验
2.2.2 治疗添加组 APS 抗炎活性
2.2.3 预防添加组 APS 抗炎活性
2.2.4 同时添加组 APS 抗炎活性
2.2.5 APS 对 LPS 刺激 Caco2 细胞单层 Isc 变化的影响
2.2.6 APS 对 LPS 刺激的 Caco2 细胞紧密连接蛋白表达的影响
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 黄芪多糖的硫酸化修饰及其细胞毒性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 仪器
3.1.3 APS 的硫酸化修饰
3.1.4 结构分析
3.1.5 SAPS 的细胞毒性试验
3.1.6 数据分析
3.2 结果与讨论
3.2.1 SAPS 的紫外光谱
3.2.2 SAPS 的红外光谱
3.2.3 SAPS 的细胞毒性试验
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 硫酸化黄芪多糖的体外抗炎活性研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 仪器
4.1.3 液体配置
4.1.4 SAPS 的抗炎试验
4.1.5 RT-qPCR 方法测定相关基因 mRNA 相对表达量
4.1.6 Western Blot 方法分析相关蛋白表达
4.1.7 统计方法
4.2 结果
4.2.1 SAPS 对 Caco2 细胞炎症因子 mRNA 表达的影响
4.2.2 SAPS 对紧密连接蛋白和 TLR4 mRNA 和蛋白表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 黄芪多糖和硫酸化黄芪多糖对 LPS 刺激肉仔鸡的抗炎及免疫调节活性研究
5.1 材料与方法
5.1.1 试验动物及处理
5.1.2 样品采集和处理
5.1.3 检测指标及方法
5.1.4 统计分析
5.2 试验结果
5.2.1 肉仔鸡生产性能
5.2.2 肉仔鸡免疫器官指数
5.2.3 肉仔鸡血液指标
5.2.4 肉仔鸡外周血淋巴细胞增殖
5.2.5 肉仔鸡外周血淋巴细胞上清液指标
5.2.6 肉仔鸡肠道形态
5.2.7 肉仔鸡肠道免疫细胞
5.2.8 肉仔鸡肠道黏膜炎症因子 mRNA 表达
5.2.9 肉仔鸡肠道黏膜紧密连接蛋白和 TLR4 mRNA 表达
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 总体结论与建议
6.1 本研究的主要结论
6.2 本研究的创新点
6.3 有待进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3951028
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