滑液支原体乳酸脱氢酶生物学功能的研究

发布时间：2024-03-26 05:45

　　鸡滑液支原体(Mycoplasma Synoviae, MS)是鸡的主要致病性支原体之一,其主要引起鸡和火鸡的关节肿大、滑液囊及肌腱发炎和实质器官的肿大。虽然滑液支原体的感染不会引起家禽的直接死亡,但其一旦在鸡群中感染就很难根除,其可在鸡群中长期蔓延从而导致鸡群的生长发育迟缓、死亡淘汰率增高、鸡肉的品质和鸡蛋的产量大幅下降。最严重的是滑液支原体易与其他病原体发生交叉感染,加剧各病原体致病力,增加了死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。目前,针对滑液支原体的预防和治疗的药物很少并且相关研究的文献也较少。因此,进行滑液支原体传染和致病机理的研究,必将为滑液支原体预防和治疗药物的研发奠定基础。基于此,本人通过扩增获得了滑液支原体WVU1853株乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)的基因,并用它构建了原核表达载体进行了表达,进而完成了LDH的酶促反应动力学、细胞定位及其生物学功能的研究。 1.根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS) MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上、下游引物,通过PCR扩增获得MS WVU1853...

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图6重组蛋白Westem-blot分析

这种蛋白可与MS和His-LDH特异性结合，大小分别为34kDa和36kDa(图6)kDa12 ‘^36^34图6重组蛋白Westem-blot分析Fig.6Westem-blotanalysisoftherecombinantprotein1：全菌蛋白....

图1A:His-LDH与兔肌肉LDH活性比较;B:His-LDH浓度对酶促反应速度的影响;C:底物（丙酮酸）浓度对酶促反应速度的影响

兔肌肉LDH作为标准品，LDH纯化蛋白作为粗酶液，两种样品比对酶活结果粗酶液活性略高（图1A)，当丙酮酸浓度不变时，LDH活性随粗酶液量的增加而升高(图IB)。当丙酮酸浓度不同时LDH的酶活也有差异（图1C)。-24-

图2:A:温度对酶活的影响;B:pH对酶活的影响;C:双倒数法求酶的Km和最大反应速率

1/(S)(mmol/1.)-1图2:A:温度对酶活的影响;B:pH对酶活的影响;C:双倒数法求酶的Km和最大反应速率Fig2:A:EffectoftemperatureonHis-LDHactivityinvitro;B:Effecto....

图1MSWVU1853膜蛋白的Westem-blot

图1MSWVU1853膜蛋白的Westem-blotnti-serumagainstHis-LDHbindstomembraneproteinsofMSWVU1853byWestem-blot.VU1853全菌蛋白；2:亲水蛋白；3:膜蛋白；4....

本文编号：3939452