不同激素处理对天女木兰种子休眠解除的影响及ABA受体MsPYR1基因的功能分析
发布时间：2023-05-17 22:55
天女木兰(Magnolia sieboldii K.Koch,Ms)是集观赏、药用价值于一身的木兰科落叶小乔木,种子具有深休眠特性,繁育困难。ABA(abscisic acid,ABA)受体PYR/PYL/RCARs基因家族作为ABA信号传导通路的起始组分发挥着重要的作用,对于揭开种子休眠解除的作用机制具有重要意义。本研究基于天女木兰种子转录组数据,筛选出天女木兰中5个AtPYRL同源基因(MsPYR/PYLs/RCAR,MsPYLs)中最具有代表性的MsPYR1基因,并以天女木兰PYR1为研究对象,利用基因克隆、实时定量PCR、蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)、亚细胞定位、遗传转化等技术,对其功能进行初步分析,为后期验证其功能打下基础,取得主要结果如下:(1)GA3处理后(4℃)层积过程中,种子内GA3含量增加,种子萌发率提高;ABA处理后(4℃)层积过程中,种子内ABA含量增加,种子萌发率降低。通过对层积过程中种子的含水量测定,绘制出天女木兰种子吸水曲线,由此确定了干种子、层积第0 d、16 d、40 d、56 d这5个关键...
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 植物激素在种子休眠和萌发中的作用
1.1.1 ABA在种子休眠中的作用
1.1.2 ABA与GA相互作用调控种子的休眠和萌发
1.2 种子萌发的吸水过程
1.3 ABA受体研究进展
1.4 PYR/PYL/RCARs介导的信号传导通路相关调控因子
1.4.1 负调控因子——PP2Cs
1.4.2 正调控因子——SnRK2
1.5 ABA受体PYR/PYL/RCARs基因家族介导的ABA信号转导途径
1.6 ABA受体PYR/PYL/RCARs基因家族相关功能研究
1.7 研究目的与意义
第二章 不同激素处理对种子萌发率和内源激素的影响
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 材料处理
2.2.2 种子含水量测定
2.2.3 种子的萌芽率测定
2.2.4 内源激素测定
2.3 结果与分析
2.3.1 种子休眠解除过程中吸水特征以及关键时间点确定
2.3.2 不同处理天女木兰种子的萌发率
2.3.3 天女木兰种子在层积过程中的内源激素含量的变化
2.4 讨论与小结
第三章 天女木兰MsPYLs基因家族表达模式分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 MsPYLs和 AtPYLs多序列比对、同源进化分析
3.2.2 材料处理
3.2.3 植物总RNA提取
3.2.4 反转录合成c DNA
3.2.5 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)
3.3 结果与分析
3.3.1 MsPYLs的序列分析
3.3.2 MsPYLs基因家族在休眠种子中表达模式分析
3.3.3 MsPYLs基因在不同处理的天女木兰种子层积过程中的表达模式分析
3.4 讨论与小结
第四章 天女木兰MsPYR1 基因的克隆及生物信息学分析
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 MsPYR1 基因的克隆
4.2.2 MsPYR1 基因的生物信息学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 总RNA提取、检测
4.3.2 天女木兰MsPYR1 基因的克隆
4.3.3 MsPYR1 生物信息学分析
4.4 讨论与小结
第五章 天女木兰MsPYR1 基因的功能分析
5.1 试验材料
5.2 试验方法
5.2.1 材料处理
5.2.2 种子的萌芽率测定
5.2.3 MsPYR1 的表达分析
5.2.4 不同激素处理层积过程中MsPYR1 基因在蛋白丰度上的变化
5.2.5 MsPYR1 基因的亚细胞定位分析
5.2.6 天女木兰MsPYR1 基因在拟南芥中的遗传转化
5.3 结果与分析
5.3.1 MsPYR1 组织特异性分析
5.3.2 不同浓度ABA处理对天女木兰层积种子的萌芽率的影响
5.3.3 MsPYR1 在不同浓度ABA处理的层积过程中表达模式
5.3.4 ABA与 FL处理对种子萌芽率的影响
5.3.5 ABA信号转导通路相关基因的表达分析
5.3.6 Western Blot分析不同激素处理层积过程中MsPYR1 在蛋白丰度上的变化
5.3.7 MsPYR1 的亚细胞定位
5.3.8 拟南芥培养情况
5.3.9 转基因拟南芥抗性筛选
5.4 讨论与小结
第六章 结论
参考文献
致谢
本文编号：3818164
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 植物激素在种子休眠和萌发中的作用
1.1.1 ABA在种子休眠中的作用
1.1.2 ABA与GA相互作用调控种子的休眠和萌发
1.2 种子萌发的吸水过程
1.3 ABA受体研究进展
1.4 PYR/PYL/RCARs介导的信号传导通路相关调控因子
1.4.1 负调控因子——PP2Cs
1.4.2 正调控因子——SnRK2
1.5 ABA受体PYR/PYL/RCARs基因家族介导的ABA信号转导途径
1.6 ABA受体PYR/PYL/RCARs基因家族相关功能研究
1.7 研究目的与意义
第二章 不同激素处理对种子萌发率和内源激素的影响
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.2.1 材料处理
2.2.2 种子含水量测定
2.2.3 种子的萌芽率测定
2.2.4 内源激素测定
2.3 结果与分析
2.3.1 种子休眠解除过程中吸水特征以及关键时间点确定
2.3.2 不同处理天女木兰种子的萌发率
2.3.3 天女木兰种子在层积过程中的内源激素含量的变化
2.4 讨论与小结
第三章 天女木兰MsPYLs基因家族表达模式分析
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 MsPYLs和 AtPYLs多序列比对、同源进化分析
3.2.2 材料处理
3.2.3 植物总RNA提取
3.2.4 反转录合成c DNA
3.2.5 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)
3.3 结果与分析
3.3.1 MsPYLs的序列分析
3.3.2 MsPYLs基因家族在休眠种子中表达模式分析
3.3.3 MsPYLs基因在不同处理的天女木兰种子层积过程中的表达模式分析
3.4 讨论与小结
第四章 天女木兰MsPYR1 基因的克隆及生物信息学分析
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 MsPYR1 基因的克隆
4.2.2 MsPYR1 基因的生物信息学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 总RNA提取、检测
4.3.2 天女木兰MsPYR1 基因的克隆
4.3.3 MsPYR1 生物信息学分析
4.4 讨论与小结
第五章 天女木兰MsPYR1 基因的功能分析
5.1 试验材料
5.2 试验方法
5.2.1 材料处理
5.2.2 种子的萌芽率测定
5.2.3 MsPYR1 的表达分析
5.2.4 不同激素处理层积过程中MsPYR1 基因在蛋白丰度上的变化
5.2.5 MsPYR1 基因的亚细胞定位分析
5.2.6 天女木兰MsPYR1 基因在拟南芥中的遗传转化
5.3 结果与分析
5.3.1 MsPYR1 组织特异性分析
5.3.2 不同浓度ABA处理对天女木兰层积种子的萌芽率的影响
5.3.3 MsPYR1 在不同浓度ABA处理的层积过程中表达模式
5.3.4 ABA与 FL处理对种子萌芽率的影响
5.3.5 ABA信号转导通路相关基因的表达分析
5.3.6 Western Blot分析不同激素处理层积过程中MsPYR1 在蛋白丰度上的变化
5.3.7 MsPYR1 的亚细胞定位
5.3.8 拟南芥培养情况
5.3.9 转基因拟南芥抗性筛选
5.4 讨论与小结
第六章 结论
参考文献
致谢
本文编号：3818164
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