长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究

发布时间：2024-02-07 06:15

　　背景宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为重要的公共健康问题。宫颈癌发病率占女性恶性肿瘤的第二位,其死亡率占女性生殖系统恶性肿瘤首位。目前,手术、化疗和放疗是宫颈癌最常用的治疗手段,但由于多数宫颈癌细胞对化疗药物具有耐药性,导致化疗药物对宫颈癌的治疗效果较差。而对于预后较差的晚期及复发性宫颈癌,目前也同样缺乏有效的治疗方法。因此,探索创新型治疗方法可能是宫颈癌治疗突破的关键。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,Lnc RNA)是一类超过200个核苷酸,并具有与m RNA结构特征相似的非编码RNA,大多数是由RNA聚合酶II转录产生的。Lnc RNA可形成复杂的二级结构,可提供与多个核酸或蛋白质结合的空间。Lnc RNA虽然不编码蛋白质,但其可通过转录和转录后水平调控影响多种基因的表达水平。有研究发现,Lnc RNA的表达与多种肿瘤密切相关,如结肠癌、乳腺癌、肝癌等,但在宫颈癌中的机制仍尚未明确。方法:本研究采用TCGA数据库对3对宫颈癌组织和相应的癌旁组织进行差异Lnc RNA的筛选,对筛选出的5个上调和5个下调最明显的lnc RNA进行quantitative...

【文章页数】：157 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第一部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的异常表达的筛选和验证
    1.引言
    2.材料与方法
        2.1 .组织标本
        2.2 细胞复苏、传代和培养
        2.3 主要试剂
        2.4 主要仪器
        2.5 qRT-PCR
        2.6 In situ hybridization(ISH)
        2.7 统计分析
    3.结果
        3.1 C5orf66-AS1 在宫颈癌组织中高表达
        3.2 C5orf66-AS1 在宫颈癌细胞中高表达
        3.3 C5orf66-AS1 与宫颈癌患者的预后相关性
    4.讨论
    参考文献
第二部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的生物学功能
    1.引言
    2.材料与方法
        2.1 细胞培养
        2.2 主要试剂
        2.3 主要仪器
        2.4 qRT-PCR
        2.5 质粒的构建和提取
        2.6 Cell counting kit-8(CCK-8)
        2.7 克隆形成实验
        2.8 细胞周期
        2.9 细胞凋亡
        2.10 划痕实验
        2.11 Transwell实验
        2.12 统计分析
    3.结果
        3.1 构建上调或下调C5orf66-AS1 表达的宫颈癌细胞株
        3.2 C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞株的增殖能力
        3.3 C5orf66-AS1 能调控宫颈癌的细胞周期
        3.4 下调C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞的凋亡
        3.5 C5orf66-AS1 对宫颈癌细胞的侵袭转移无影响
    4.讨论
    参考文献
第三部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 调控宫颈癌细胞增殖能力的分子机制
    1.引言
    2.材料与方法
        2.1 .细胞培养
        2.2 主要试剂
        2.3 主要仪器
        2.4 试剂的配置
        2.5 qRT-PCR
        2.6 蛋白质免疫印迹(western blot)
        2.7 RNA免疫共沉淀(RIP)
        2.8 荧光素酶报告实验
        2.9 免疫组化(IHC)
        2.10 核质分离
        2.11 CCK-8
        2.12 动物实验
        2.13 统计分析
    3.结果
        3.1 LncRNA C5orf66-AS1在宫颈癌细胞核和细胞质中的分布
        3.2 C5orf66-AS1 调控miRNA的筛选
        3.3 C5orf66-AS1 调控miR-637的验证
        3.4 MiR-637在宫颈癌中的表达
        3.5 MiR-637的靶基因筛选
        3.6 MiR-637的靶基因验证
        3.7 C5orf66-AS1 可调控RING1 的表达
        3.8 C5orf66-AS1 通过竞争性结合miR-637调控RING1的表达,最终影响宫颈癌细胞的增殖能力
        3.9 在实验动物中下调lncRNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长
    4.讨论
    参考文献
第四部分 全文总结
    4.1 主要创新点
    4.2 主要结论
    4.3 研究展望
第五部分 长链非编码RNA(lncRNA)在宫颈癌中的研究现状
    非编码RNA的生物发生和功能
    宫颈癌中循环lncRNAs下调
    LncRNA-HOTAIR
    LncRNA-H19
    LncRNA-XIST
    LncRNA-CCHE1
    LncRNA-EBIC
    LncRNA-MALAT1
    LncRNA-ANRIL
    LncRNA-LET
    LncRNA-NEAT1
    LncRNA-BLACAT1
    LncRNA-UFC1
    LncRNA-SNHG16
    LncRNA-SNHG20
    结论和展望
    参考文献
综述一 长链非编码RNA在妇科肿瘤中的调控表达
    参考文献
综述二 妇科肿瘤中的 miRNA:具有重大影响的小分子
    参考文献
综述三 趋化因子受体对卵巢癌患者免疫功能的影响
    参考文献
攻读博士期间发表的论文
攻读博士期间参与的课题研究
中英文缩略词表
致谢



本文编号：3896903