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长链非编码RNA01278竞争性抑制miR-500b-5p调控ACTG2促进平滑肌细胞增殖在主动脉夹层形成中的作用机制研

发布时间:2023-05-27 03:37
  背景:主动脉夹层(aortic dissection,AD)是心血管疾病中较为凶险的一种疾病,其发病急进展快,一经发现需要立即给予医疗处理,否则会出现致命性风险。AD的主要发病原因是血液由血管的内膜破口进入血管中层,在血压的驱动下在血管夹层中向前流动从而撕裂血管。临床常见的症状为突发的前胸及后背部剧烈的疼痛。主动脉夹层常见的发病因素包括遗传性因素如马凡综合症,Ehlers-Danlos综合症,和非遗传性因素如主动脉中层囊性坏死、高血压、动脉粥样硬化、梅毒性大动脉炎、创伤性动脉瘤等,其中高血压被认为是最主要的诱发因素。目前关于主动脉夹层的具体发病机制尚无明确定论,主要认为和血管中层平滑肌细胞增殖和凋亡失衡有关。已有研究表明,主动脉夹层组织中血管平滑肌的增殖程度明显高于正常人的升主动脉组织,并通过一系列体内和体外实验验证编码平滑肌细胞收缩的标志蛋白增高/减低对主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。当前这一灾难性疾病尚缺乏早期有效的诊断措施,特别是血清学诊断标志物,目前尚无集特异性和敏感性一体的AD血清诊疗标志物。大部分AD患者仍是通过发病后行主动脉血管造影来明确诊断。但因临床以胸背部疼痛为首发症...

【文章页数】:125 页

【学位级别】:博士

【文章目录】:
中文摘要
Abstract
中英文缩略表
综述 长链非编码RNA在心血管疾病中的研究进展
    参考文献
第1章 绪论
第2章 主动脉夹层升主动脉组织特点及增殖型血管平滑肌细胞模型诱导
    概述
    2.1 实验材料
        2.1.1 主动脉夹层患者入组及对照体系建立
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 方法
        2.2.1 升主动脉组织HE染色法
        2.2.2 升主动脉组织免疫组化
    2.3 结果
        2.3.1 入组患者信息
        2.3.2 血管形态学特点
        2.3.3 人升主动脉血管平滑肌细胞增殖型细胞模型诱导
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 主动脉夹层患者升主动脉血管平滑肌细胞长链非编码RNA和m RNA表达谱的研究
    概述
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 lncRNA和 m RNA芯片信息
    3.2 方法
        3.2.1 实验组和对照组组织RNA提取
        3.2.2 lncRNA和 m RNA基因芯片检测
        3.2.3 基因芯片实时定量PCR验证
        3.2.4 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 升主动脉样本检测
        3.3.2 RNA琼脂糖凝胶电泳
        3.3.3 标记效率质控
        3.3.4 lncRNA和 mRNA高通量基因芯片结果
        3.3.5 lncRNA和 mRNA高通量基因芯片原始和矫正结果
        3.3.6 差异表达lncRNA高通量基因芯片结果筛选
        3.3.7 差异表达m RNA高通量基因芯片结果筛选
        3.3.8 实时定量PCR验证lncRNA和 mRNA高通量基因芯片准确性
    3.4 讨论
第4章 主动脉夹层患者升主动脉平滑肌组织差异表达lncRNA和 mRNA的现代高通量生物信息学分析
    概述
    4.1 生物信息学研究工具
    4.2 研究方法
        4.2.1 差异表达m RNA高通量基因芯片现代生物信息学分析
        4.2.2 差异表达lncRNA和 miRNA ceRNA调控网络构建
        4.2.3 韦恩分析
    4.3 结果
        4.3.1 交叉融合分析主动脉夹层基因测序
        4.3.2 共同表达差异基因富集分析
        4.3.3 共表达差异基因蛋白互作网络
        4.3.4 主动脉夹层核心发病基因预测
        4.3.5 lncRNA及 miRNA预测以及韦恩分析
        4.3.6 lncRNA及miRNA以及mRNA调控网络
    4.4 讨论
第5章 linc01278 在主动脉夹层血管平滑肌细胞增殖及表型转化过程中的分子机制
    概述
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验试剂
        5.1.2 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1荧光原位杂交实验
        5.2.2 linc01278 干扰实验
        5.2.3 linc01278 过表达实验
        5.2.4 细胞增殖实验
        5.2.5 细胞迁移实验
    5.3 结果
        5.3.1 荧光原位杂交确认linc01278 位于细胞质中
        5.3.2 敲低linc01278 后主动脉夹层血管平滑肌细胞发生表型转换
        5.3.3 过表达linc01278 后主动脉夹层血管平滑肌细胞发生表型转换
    5.4 讨论
第6章 miR-500b-5p与 linc01278和ACTG2 结合位点验证
    概述
    6.1 实验材料
        6.1.1 实验试剂
        6.1.2 实验仪器
        6.1.3 荧光素酶报告基因质粒
    6.2 实验方法
        6.2.1 linc01278和ACTG2 结合位点序列合成
        6.2.2 将位点序列插入荧光素酶报告基因质粒
        6.2.3 将带有目的序列的pGL6-miR质粒转染293T细胞
        6.2.4 萤光素酶报告基因检测
        6.2.5 统计学分析
    6.3 结果
        6.3.1 linc01278与miR-500b-5p结合位点验证
        6.3.2 ACTG2与miR-500b-5p的结合位点验证
    6.4 讨论
第7章 结论
创新点与不足之处
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号:3823816

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