前列腺癌特异性核酸适配子MR分子探针的构建及其体内外诊治一体的实验研究
发布时间：2023-05-20 10:00
目的:1.筛选前列腺癌EpCAM特异性核酸适配子Aptamer,验证其对EpCAM阳性的前列腺癌细胞的亲和性。2.将EpCAM特异性Aptamer与活性促凋亡分子tBid共偶联GoldMag金磁纳米微粒,构建分子探针AptamerEpCAM-GoldMag-tBid,验证分子探针对EpCAM阳性前列腺癌细胞的亲和性及靶向促凋亡活性。3.构建前列腺癌荷瘤裸鼠模型,在体内外水平分别验证分子探针AptamerEpCAM-GoldMag-tBid特异性靶向杀伤前列腺癌组织细胞的生物活性及其MR成像能力。方法:1.用流式细胞术和Western Blot分别检测三种人前列腺癌细胞株PC-3、DU145和LNCaP的EpCAM表达水平。2.设计随机单链DNA文库和上、下游引物。将慢病毒表达载体pCDH-EpCAM转染工程细胞人源胚胎肾细胞HEK293T,并以该转染细胞为靶标,利用细胞SELEX技术筛选EpCAM特异性Aptamer,经过12轮体外筛选,对得到的DNA产物行克隆和测序鉴定,最终得到Ep1和Ep2两条DNA序列作为目的Aptamer序列。3.用...
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
实验一 前列腺癌EpCAM核酸适配子的筛选及鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 菌种与质粒
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
1.5 主要溶液的配制
2 方法
2.1 流式细胞术检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
2.2 Western Blot检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
2.3 细胞SELEX筛选的引物设计与合成
2.4 前列腺癌EpCAM核酸适配子的细胞SELEX筛选
2.5 目的DNA的克隆、测序与合成
2.6 流式细胞术检测EpCAM核酸适配子的特异性
2.7 免疫荧光实验检测EpCAM核酸适配子的特异性
3 结果
3.1 检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
3.2 前列腺癌EpCAM核酸适配子的细胞SELEX筛选
3.3 前列腺癌EpCAM核酸适配子的DNA测序鉴定
3.4 前列腺癌EpCAM核酸适配子的特异性鉴定
4 讨论
实验二 前列腺癌特异性分子探针Aptamer EpCAM-GoldMag-tBid的构建及其体外活性鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 蛋白制品
1.3 核酸适配子
1.4 主要试剂
1.5 主要仪器
1.6 主要溶液的配制
2 方法
2.1 检测核酸适配子和tBid蛋白在金磁纳米微粒表面的偶联效率
2.2 分子探针AptamerEpCAM-GoldMag-tBid的构建
2.3 流式细胞术检测分子探针的细胞特异性
2.4 免疫荧光实验检测分子探针的细胞特异性
2.5 流式细胞术检测分子探针体外杀伤EpCAM阳性细胞的能力
3 结果
3.1 检测核酸适配子和tBid蛋白在金磁纳米微粒表面的偶联效率
3.2 检测分子探针的细胞特异性
3.3 检测分子探针体外杀伤EpCAM阳性细胞的能力
4 讨论
实验三 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌的MR特异性成像及其体内生物活性鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 主要溶液的配制
2 方法
2.1 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌细胞的MR特异性成像
2.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的构建
2.3 检测EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠肿瘤及重要脏器组织中的表达
2.4 组织免疫荧光实验检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid的肿瘤组织特异性
2.5 分子探针Ep1-GoldMag-tBid在体实验分组及用药方案
2.6 HE染色观察分子探针Ep1-GoldMag-tBid对裸鼠正常重要脏器的影响
2.7 前列腺癌荷瘤裸鼠MR特异性成像
3 结果
3.1 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌细胞的MR特异性成像
3.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的构建
3.3 检测EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠肿瘤及重要脏器组织中的表达
3.4 检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid的肿瘤组织特异性
3.5 检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid在体抗肿瘤特性
3.6 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌荷瘤裸鼠的MR特异性成像
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：3820915
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
实验一 前列腺癌EpCAM核酸适配子的筛选及鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 菌种与质粒
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器
1.5 主要溶液的配制
2 方法
2.1 流式细胞术检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
2.2 Western Blot检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
2.3 细胞SELEX筛选的引物设计与合成
2.4 前列腺癌EpCAM核酸适配子的细胞SELEX筛选
2.5 目的DNA的克隆、测序与合成
2.6 流式细胞术检测EpCAM核酸适配子的特异性
2.7 免疫荧光实验检测EpCAM核酸适配子的特异性
3 结果
3.1 检测前列腺癌细胞EpCAM的表达情况
3.2 前列腺癌EpCAM核酸适配子的细胞SELEX筛选
3.3 前列腺癌EpCAM核酸适配子的DNA测序鉴定
3.4 前列腺癌EpCAM核酸适配子的特异性鉴定
4 讨论
实验二 前列腺癌特异性分子探针Aptamer EpCAM-GoldMag-tBid的构建及其体外活性鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 蛋白制品
1.3 核酸适配子
1.4 主要试剂
1.5 主要仪器
1.6 主要溶液的配制
2 方法
2.1 检测核酸适配子和tBid蛋白在金磁纳米微粒表面的偶联效率
2.2 分子探针AptamerEpCAM-GoldMag-tBid的构建
2.3 流式细胞术检测分子探针的细胞特异性
2.4 免疫荧光实验检测分子探针的细胞特异性
2.5 流式细胞术检测分子探针体外杀伤EpCAM阳性细胞的能力
3 结果
3.1 检测核酸适配子和tBid蛋白在金磁纳米微粒表面的偶联效率
3.2 检测分子探针的细胞特异性
3.3 检测分子探针体外杀伤EpCAM阳性细胞的能力
4 讨论
实验三 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌的MR特异性成像及其体内生物活性鉴定
1 材料
1.1 细胞系
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 主要溶液的配制
2 方法
2.1 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌细胞的MR特异性成像
2.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的构建
2.3 检测EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠肿瘤及重要脏器组织中的表达
2.4 组织免疫荧光实验检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid的肿瘤组织特异性
2.5 分子探针Ep1-GoldMag-tBid在体实验分组及用药方案
2.6 HE染色观察分子探针Ep1-GoldMag-tBid对裸鼠正常重要脏器的影响
2.7 前列腺癌荷瘤裸鼠MR特异性成像
3 结果
3.1 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌细胞的MR特异性成像
3.2 前列腺癌荷瘤裸鼠模型的构建
3.3 检测EpCAM在前列腺癌荷瘤裸鼠肿瘤及重要脏器组织中的表达
3.4 检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid的肿瘤组织特异性
3.5 检测分子探针Ep1-GoldMag-tBid在体抗肿瘤特性
3.6 分子探针Ep1-GoldMag-tBid对前列腺癌荷瘤裸鼠的MR特异性成像
4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
本文编号：3820915
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