人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究

发布时间：2023-04-11 18:41

　　结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是一类常见的消化系统恶性肿瘤,严重威胁人类健康。传统的放化疗并不能显著提高患者的生存率,因而探索一种新型有效的结直肠癌治疗手段至关重要,近些年溶瘤病毒的肿瘤治疗应运而生。溶瘤病毒可选择性地在肿瘤细胞中复制并裂解肿瘤细胞,同时激活机体的抗肿瘤免疫反应;然而,直接通过静脉注射溶瘤病毒会引起抗病毒免疫反应而降低其作用效果,因而选择合适的载体将溶瘤病毒运输至肿瘤部位是实现安全、高效、精准治疗的关键。本研究我们利用人经血干细胞(Human menstrual blood-derived stem cells,Men SCs)运输溶瘤腺病毒,探索其作为载体的靶向运输能力和结合溶瘤腺病毒对CRC的治疗效果。MenSCs是近年来新发现的一种成体干细胞,与其他间充质干细胞相比,具有来源丰富、采集方便无创、体外扩增迅速、无伦理道德争议等优势。本研究中,我们首先从女性志愿者经血样本中分离获取经血源干细胞,并对其进行传代培养和相关表面标记的鉴定,进而探索其作为病毒运输载体的可行性和结合溶瘤病毒治疗CRC的有效性。为了优化溶瘤病毒对Men SCs的感染效率,...

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
前言
第一部分 经血干细胞的分离培养及鉴定
    1.1 前言
    1.2 材料和试剂
        1.2.1 MenSCs的来源
        1.2.2 主要试剂
        1.2.3 主要设备
    1.3 实验方法
        1.3.1 MenSCs的分离培养
        1.3.2 细胞冻存和复苏
        1.3.3 MenSCs细胞表面标记分子鉴定
        1.3.4 MenSCs诱导分化实验
        1.3.5 免疫荧光检测MenSCs表面干性分子
    1.4 实验结果
        1.4.1 MenSCs的分离培养
        1.4.2 MenSCs细胞成骨成脂分化结果
        1.4.3 MenSCs细胞表面标记分子流式鉴定结果
        1.4.4 MenSCs表面干性标记的表达
    1.5 讨论
    1.6 结论
第二部分 MenSCs-CRAd5/F11 细胞株的构建及功能鉴定
    2.1 前言
    2.2 材料与试剂
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要设备
        2.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源
        2.2.4 结直肠癌细胞的培养
        2.2.5 溶瘤腺病毒CRAd5/F11的构建及分离纯化
        2.2.6 动物实验
    2.3 实验方法
        2.3.1 Western Blot检测MenSCs表面受体蛋白表达
        2.3.2 CRAd5/F11 感染MenSCs
        2.3.3 电镜的检测CRAd5/F11
        2.3.4 CRAd5/F11对MenSCs毒性作用的检测
        2.3.5 CRAd5/F11 感染后MenSCs上清中病毒颗粒数的检测
        2.3.6 MenSCs-CRAd5/F11 细胞表面标记分子鉴定
        2.3.7 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤细胞的趋化实验
        2.3.8 MenSCs-CRAd5/F11 在肿瘤小鼠体内的迁移实验
        2.3.9 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 MenSCs表面受体蛋白的表达
        2.4.2 溶瘤病毒对MenSCs感染效率的检测
        2.4.3 MenSCs细胞内病毒颗粒的电镜检测
        2.4.4 CRAd5/F11对MenSCs的毒性作用
        2.4.5 感染CRAd5/F11的MenSCs上清中病毒颗粒数检测
        2.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 表面标记的表达情况
        2.4.7 MenSCs-CRAd5/F11 体外对肿瘤细胞的趋化作用
        2.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 在体内对肿瘤组织的归巢作用
    2.5 讨论
        2.5.1 CRAd5/F11 依赖细胞受体CD46 感染MenSCs
        2.5.2 CRAd5/F11对MenSCs和肿瘤细胞的毒性作用
        2.5.3 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤的靶向迁移
    2.6 结论
第三部分 MenSCs运载CRAd5-F11 治疗结直肠癌的体内外实验研究
    3.1 前言
    3.2 材料与试剂
        3.2.1 主要试剂
        3.2.2 主要设备
        3.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源
        3.2.4 溶瘤腺病毒CRAd5/F11及CRAd5/F11-TIS的构建
    3.3 实验方法
        3.3.1 WB检测肿瘤细胞表面腺病毒结合受体的表达
        3.3.2 CRAd5/F11对肿瘤细胞毒性作用的检测
        3.3.3 运载CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的抑制实验
        3.3.4 荷瘤小鼠肿瘤模型的建立及肿块大小的测量
        3.3.5 MenSCs的移植
        3.3.6 组织标本的制备
        3.3.7 肿瘤组织的免疫组化分析
        3.3.8 肿瘤组织细胞凋亡的TUNEL检测
        3.3.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS对肿瘤的作用
        3.3.10 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 肿瘤细胞表面腺病毒受体蛋白的表达
        3.4.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞具有杀伤作用
        3.4.3 携带CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的杀伤作用
        3.4.4 病毒抗体血清对溶瘤病毒杀伤肿瘤细胞的影响
        3.4.5 体内动物实验操作及时间安排示意图
        3.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 移植后抑制肿瘤的生长
        3.4.7 肿瘤组织免疫组化相关蛋白的检测
        3.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 诱导肿瘤组织凋亡
        3.4.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS在体内对肿瘤的抑制作用
    3.5 讨论
        3.5.1 MenSCs运载CRAd5/F11 对肿瘤的治疗
        3.5.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞的杀伤和抑制机制
        3.5.3 溶瘤病毒结合基因治疗
        3.5.4 溶瘤病毒CRAd5/F11从MenSCs胞内释放的机制探讨
        3.5.5 MenSCs结合溶瘤病毒治疗肿瘤的安全性问题
    3.6 结论
全文总结与展望
参考文献
综述 间充质干细胞的基本特性与疾病治疗的应用
    参考文献
作者简历及在读期间取得的科研成果



本文编号：3789573