PSMC2对前列腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

发布时间：2023-04-04 11:25

　　目的:前列腺癌(Prostate Cancer)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤。最新流行病学统计数据显示,近年来随着我国人口老龄化加剧、饮食习惯改变等不良因素影响,我国前列腺癌发病率及致死病例呈上升趋势,发病人群呈年轻化趋势,形势严峻。前列腺癌起病常隐匿、临床表现缺乏特异性、潜伏期较长,多半患者在出现较严重的血尿、尿路梗阻、骨痛及病理性骨折等被确诊时已是中晚期。局灶性病灶行根治性术后预后良好,但中晚期治疗手段有限、预后差。因此,早发现、早诊断、早治疗对于前列腺癌尤为重要,然而目前尚缺乏前列腺癌早期筛查的可靠生化指标及行之有效的靶向治疗位点;故深入探究前列腺癌发生、发展的分子机制,寻找新的筛查指标及靶向治疗位点一直是临床与相关研究领域的热点。ATP酶蛋白酶体26S亚基2(proteasome 26S subunit,ATPase 2,PSMC2)是蛋白编码基因,是26S蛋白酶体的19S调节颗粒的必要组分,它能与ATP及核苷酸结合,具有水解酶及核苷三磷酸酶的功能,在胞内选择性降解蛋白质中发挥了关键作用,参与调节细胞分化及增殖、细胞凋亡、能量代谢及信号转导等诸多生物学活动。有研究表明PS...

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第1章 前言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要实验仪器设备
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 实验试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 Celigo细胞计数检测细胞生长
        2.2.3 细胞克隆形成检测
        2.2.4 细胞划痕试验
        2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.2.6 细胞Transwell实验
        2.2.7 HE、免疫组织化学染色(HE staining,IHC)
            2.2.7.1 HE染色:
            2.2.7.2 IHC染色:
            2.2.7.3 结果观察:
        2.2.8 Western Blot检测
            2.2.8.1 细胞总蛋白抽提
            2.2.8.2 SDS-PAGE
            2.2.8.3 免疫印迹(湿转)
            2.2.8.4 免疫显色:
            2.2.8.5 加ECL、曝光、显影、定影
        2.2.9 Real-time qPCR检测
            2.2.9.1 引物设计
            2.2.9.2 总RNA抽提
            2.2.9.3 反转录获得cDNA
            2.2.9.4 Real-time PCR检测
            2.2.9.5 数据分析
        2.2.10 目的基因RNA干扰慢病毒载体制备
            2.2.10.1 实验质粒
            2.2.10.2 实验菌株
            2.2.10.3 RNA干扰靶点设计及双链DNA oligo制备
            2.2.10.4 线性化载体制备
        2.2.11 慢病毒包装与质量检测
            2.2.11.1 实验材料
            2.2.11.2 质粒的制备:
            2.2.11.3 质粒转染与慢病毒收获
            2.2.11.4 慢病毒浓缩与纯化
            2.2.11.5 慢病毒质量检测
            2.2.11.6 滴度分析
        2.2.12 慢病毒感染细胞
            2.2.12.1 目的细胞复苏
            2.2.12.2 目的细胞慢病毒感染
        2.2.13 动物成瘤实验
        2.2.14 蛋白抗体芯片
        2.2.15 PSMC2 过表达与Akt信号通路验证实验
        2.2.16 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 PSMC2 在前列腺癌组织及细胞系中高表达
    3.2 成功构建PSMC2 表达敲减的细胞模型
    3.3 下调PSMC2 基因表达可抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成、二维迁移及侵袭并促进其凋亡
    3.4 下调PSMC2 基因表达可抑制前列腺细胞体内成瘤能力
    3.5 PSMC2 抗前列腺癌细胞凋亡的关键分子筛查
    3.6 PSMC2 抗前列腺癌细胞凋亡的信号转导通路验证
    3.7 PSMC2/PI3K/Akt/Cyclin D1/CDK6 作用通路验证
第4章 讨论
第5章 结论
第6章 主要创新点
    不足之处
第7章 全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3781995