基于NGS技术的无创性产前筛查的临床应用研究

发布时间：2023-04-02 00:57

　　目的:目前,我国每年出生缺陷率为5.6%左右,产前诊断做为二级预防措施,在降低出生缺陷率中具有重要作用。常规产前诊断手段包括超声检查,血清学筛查,介入性取材后进行遗传学诊断等。传统的介入性产前诊断有一定的流产风险,并可能出现宫内感染等并发症;血清学筛查准确度差,假阳性率可达到40%左右,许多孕妇因此而接受不必要的介入性产前诊断。为降低不必要的介入性取材引起的风险,快速准确的无创性产前筛查势在必行。目前,利用二代测序技术(next-generation sequencing,NGS)无创性产前筛查(non-invasive prenatal test,NIPT)T21/18/13等染色体非整倍体疾病已经大规模应用于临床。大多数临床研究只单纯关注于NIPT的准确性,而未关注其实际临床应用过程。由染色体病造成的出生缺陷中,除非整倍体外,还有一类就是由胎儿染色体拷贝数变异(copy number variations,CNVs)引起的基因组病。CNVs覆盖人类基因组的12%左右,大部分位于基因沙漠区,可以遗传自父母或新发。大多数CNVs不会致病,但是当CNVs区域涉及到敏感基因或者其上游调控序...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :NIPT筛查胎儿非整倍体的临床应用评估
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 研究对象
        2.2 NIPT实验的主要试剂和仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
            2.2.3 数据分析软件
        2.3 NIPT实验方法
            2.3.1 血浆分离
            2.3.2 胎儿游离DNA的提取
            2.3.3 文库制备
            2.3.4 文库qPCR定量
            2.3.5 上机样品混合
            2.3.6 Nextseq CN500 上机文库的变性和稀释操作程序
        2.4 测序后数据分析
        2.5 病史资料统计分析
            2.5.1 病史资料的整理及分类
            2.5.2 数据的统计学分析
    3 结果
        3.1 病史资料的统计分析结果
            3.1.1 病史资料的一般特征
            3.1.2 无创性产前筛查指征及胎儿超声的统计分析结果
        3.2 NIPT筛查非整倍体结果统计分析结果
            3.2.1 胎儿染色体为T21/18/13 高风险的病例资料统计分析结果
            3.2.2 胎儿性染色体异常高风险的病例资料统计分析结果
            3.2.3 NIPT筛查结果的统计学分析结果
        3.3 于NIPT筛查后接受介入性遗传学诊断病例统计分析结果
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :探讨NIPT筛查胎儿CNVs的临床应用
    6 前言
    7 材料与方法
        7.1 研究对象
        7.2 主要试剂和仪器
            7.2.1 主要试剂
            7.2.2 主要仪器
            7.2.3 数据分析软件
        7.3 NIPT筛查CNVs实验方法
            7.3.1 血浆分离
            7.3.2 胎儿游离DNA的提取
            7.3.3 文库制备
            7.3.4 文库qPCR定量
            7.3.5 上机样品混合
            7.3.6 Nextseq CN500 上机文库的变性和稀释操作程序
        7.4 测序后数据分析
        7.5 CNV-seq实验方法
            7.5.1 基因组DNA的提取
            7.5.2 基因组DNA纯化
            7.5.3 酶反应和纯化
            7.5.4 扩增
            7.5.5 文库纯化和质控
            7.5.6 上机测序
        7.6 测序后数据分析
        7.7 羊水染色体制备及核型分析
        7.8 病史资料统计分析
            7.8.1 病史资料的整理及分类
            7.8.2 数据的统计学分析
    8 结果
        8.1 病史资料统计分析结果
        8.2 NIPT结果与CNV-seq结果及胎儿核型对比分析结果
            8.2.1 NIPT异常组与CNV-seq结果及胎儿核型对比结果
            8.2.2 NIPT正常组与CNV-seq结果及胎儿核型对比结果
        8.3 NIPT筛查胎儿CNVs统计学分析结果
    9 讨论
    10 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3778205