硫酸肝素蛋白多糖复合碱性成纤维细胞生长因子促进心梗修复的研究
发布时间：2023-03-26 23:52
心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是目前发病率和致死率较高的全球范围性疾病,也是形成慢性心衰的主要原因,严重影响了患病者的生活质量。各种原因引起的心肌梗死主要是通过阻碍心脏冠脉循环,引起心脏组织内部供血不足而造成的心肌细胞梗死、进而引起心脏功能减弱甚至消失。目前临床治疗主要采用物理介入的手段,通过移植心脏支架、搭建旁支人工血管等方法恢复冠脉循环的正常运行。然而这些介入手段并不适合所有心脏病患者,尤其是已经接受多次心脏搭桥手术的病患。因此,研究拓展不同心脏病患者的治疗手段迫在眉睫。细胞外基质(ECM)是一类非细胞成分,分布在各个组织、器官内。除了作为必需的结构成分外,细胞外基质分子还在关键细胞事件中发挥重要作用。许多疾病的发生和发展都与细胞外基质成分的变化密切相关,尤其是心血管疾病。研究发现,在心梗发生后,心脏组织内部发生心肌细胞凋亡、细胞外基质降解,胶原分子沉积形成非收缩性瘢痕组织,这些引起心脏组织的形态、结构和功能的非适应性改变。为了深入研究心肌梗死后组织微环境的变化,本研究采用转录组测序的方法研究心梗对心脏细胞外基质基因表达水平上的影响。研究发现心梗后细胞...
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第1章 绪论
1.1 细胞外基质
1.1.1 细胞外基质的组成和结构
1.1.2 心脏细胞外基质的病理变化
1.2 HSPG的结构与功能
1.2.1 HSPG的结构特征
1.2.2 HSPG的生物合成与调控
1.2.3 HSPG的生物功能及研究方法
1.2.4 HSPG与疾病的关系
1.3 HSPG与生长因子
1.3.1 HSPG与生长因子相互作用
1.3.2 碱性成纤维细胞生长因子在心梗中的作用
1.3.3 HSPG对心血管疾病的影响
1.4 HSPG及其类似物作为生物材料的研究
1.4.1 生长因子载药材料
1.4.2 HSPG及其类似物作为生物材料的价值
1.5 本论文研究思路与内容
1.5.1 选题背景与研究思路
1.5.2 研究内容
第2章 细胞外基质分子在心肌梗死前后的表达变化
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 手术器械
2.3 实验方法
2.3.1 心梗模型构建
2.3.2 测序取样
2.3.3 转录组测序
2.3.4 测序数据分析
2.3.5 数据分析使用的软件
2.4 结果与讨论
2.4.1 大鼠心肌梗死造模
2.4.2 测序数据质量评估
2.4.3 细胞外基质差异基因分析
2.5 本章小结
第3章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖体外对碱性成纤维细胞生长因子的影响
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验试剂及配制
3.2.2 实验药品及细胞
3.2.3 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 脊髓组织获取
3.3.2 蛋白聚糖纯化
3.3.3 碱性成纤维生长因子bFGF的原核表达载体构建与蛋白纯化
3.3.4 SDS-PAGE电泳
3.3.5 体外结合实验
3.3.6 体外释放实验
3.3.7 心肌细胞的原代提取
3.3.8 心肌细胞粘附实验
3.3.9 成纤维细胞的培养
3.3.10 细胞活性检测
3.3.11 HSPG对bFGF生物活性的影响
3.3.12 MMP2的活性检测
3.3.13 Western blotting检测HSPG对bFGF的保护作用
3.3.14 统计分析
3.4 结果与讨论
3.4.1 碱性成纤维细胞生长因子bFGF在大肠杆菌中表达及后期纯化
3.4.2 体外结合实验
3.4.3 体外释放实验
3.4.4 心肌细胞的培养及粘附实验
3.4.5 HSPG对bFGF活性影响
3.4.6 HSPG抑止MMP2生物活性
3.4.7 HSPG对bFGF的保护作用
3.5 本章小结
第4章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心肌梗死的影响
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 实验仪器及主要耗材
4.3 实验方法
4.3.1 心肌梗死动物模型构建及治疗
4.3.2 心肌梗死动物模型成功构建的检测
4.3.3 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心梗后血管再生的影响
4.3.4 组织形态学分析
4.3.5 TUNEL染色
4.3.6 小动物心脏超声检测
4.4 结果与讨论
4.4.1 TUNEL染色分析
4.4.2 组织形态学分析心室重构
4.4.3 血管再生
4.4.4 心肌细胞存活
4.4.5 心脏功能检测
4.5 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 综合讨论
5.2 结论与展望
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：3771947
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第1章 绪论
1.1 细胞外基质
1.1.1 细胞外基质的组成和结构
1.1.2 心脏细胞外基质的病理变化
1.2 HSPG的结构与功能
1.2.1 HSPG的结构特征
1.2.2 HSPG的生物合成与调控
1.2.3 HSPG的生物功能及研究方法
1.2.4 HSPG与疾病的关系
1.3 HSPG与生长因子
1.3.1 HSPG与生长因子相互作用
1.3.2 碱性成纤维细胞生长因子在心梗中的作用
1.3.3 HSPG对心血管疾病的影响
1.4 HSPG及其类似物作为生物材料的研究
1.4.1 生长因子载药材料
1.4.2 HSPG及其类似物作为生物材料的价值
1.5 本论文研究思路与内容
1.5.1 选题背景与研究思路
1.5.2 研究内容
第2章 细胞外基质分子在心肌梗死前后的表达变化
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 手术器械
2.3 实验方法
2.3.1 心梗模型构建
2.3.2 测序取样
2.3.3 转录组测序
2.3.4 测序数据分析
2.3.5 数据分析使用的软件
2.4 结果与讨论
2.4.1 大鼠心肌梗死造模
2.4.2 测序数据质量评估
2.4.3 细胞外基质差异基因分析
2.5 本章小结
第3章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖体外对碱性成纤维细胞生长因子的影响
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验试剂及配制
3.2.2 实验药品及细胞
3.2.3 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 脊髓组织获取
3.3.2 蛋白聚糖纯化
3.3.3 碱性成纤维生长因子bFGF的原核表达载体构建与蛋白纯化
3.3.4 SDS-PAGE电泳
3.3.5 体外结合实验
3.3.6 体外释放实验
3.3.7 心肌细胞的原代提取
3.3.8 心肌细胞粘附实验
3.3.9 成纤维细胞的培养
3.3.10 细胞活性检测
3.3.11 HSPG对bFGF生物活性的影响
3.3.12 MMP2的活性检测
3.3.13 Western blotting检测HSPG对bFGF的保护作用
3.3.14 统计分析
3.4 结果与讨论
3.4.1 碱性成纤维细胞生长因子bFGF在大肠杆菌中表达及后期纯化
3.4.2 体外结合实验
3.4.3 体外释放实验
3.4.4 心肌细胞的培养及粘附实验
3.4.5 HSPG对bFGF活性影响
3.4.6 HSPG抑止MMP2生物活性
3.4.7 HSPG对bFGF的保护作用
3.5 本章小结
第4章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心肌梗死的影响
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 实验仪器及主要耗材
4.3 实验方法
4.3.1 心肌梗死动物模型构建及治疗
4.3.2 心肌梗死动物模型成功构建的检测
4.3.3 硫酸乙酰肝素蛋白多糖结合碱性成纤维细胞生长因子对心梗后血管再生的影响
4.3.4 组织形态学分析
4.3.5 TUNEL染色
4.3.6 小动物心脏超声检测
4.4 结果与讨论
4.4.1 TUNEL染色分析
4.4.2 组织形态学分析心室重构
4.4.3 血管再生
4.4.4 心肌细胞存活
4.4.5 心脏功能检测
4.5 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 综合讨论
5.2 结论与展望
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：3771947
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