硅胶-层析联用法纯化汉逊酵母HBsAg与疫苗颗粒完整性研究

发布时间：2024-02-15 11:26

　　乙型肝炎(Hepatitis B)由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起,是全球最常见的传染病之一。我国每年因乙肝感染导致死亡的人数约占全球HBV感染相关死亡人数的近50%。接种乙肝疫苗是目前防控乙型肝炎的最重要策略。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗的主要活性物质。HBsAg是由多个单体通过二硫键形成的球形病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),作为一种多聚亚基蛋白,HBsAg稳定性较差,尤其是在纯化过程中,因其易发生解聚或聚集等结构变化而造成活性损失,导致产率下降,对乙肝疫苗大规模生产造成极大的负面效应。保护抗原的完整性是解决这一问题的重要手段之一。基于此,本文使用硅胶进行初步吸附/解吸附实验,发现其可增强抗原颗粒稳定性和完整性;进一步探究不同pH条件下的抗原颗粒稳定性,基于此,对硅胶实验中吸附与解吸附步骤进行优化,得到最佳的纯化方案;再与组合层析联用进一步纯化抗原,采用穿透式离子交换层析,保护抗原结构,提升层析纯化中抗原的活性收率。如下所述:1、在硅胶对抗原颗粒稳定性和完整性分析研究中,对细胞破碎液进行硅胶处理,将洗脱液进...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．２两种疏水层析洗脱峰电泳图??（１?．Ｍａｒｋｅｒ：?２．硅胶－疏水层析洗脱峰：３．疏水层析洗脱峰）??．－ｏｅｕｔｏｎ??

?娃胶－层析联用法纯化汉逊酵母ＨＢｓＡｇ与疫苗颗粒完整性研宄???ＫＤａ?１?２?３??

图２．３两中疏水层析洗脱峰的ＨＰＳＦＣ谱图??ｌ＇ｉｇ?２．３?ＩＩＰＳｌ＇Ｃ?ｏｆｌ?ＩＢｓＡｇ?ｅｌｕｅｎｌ?ｆｒｏｍ?ｔｗｏ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｎｉｃｔｌｉｏｄｓ??

ＨＢｓＡｇ的颗粒状结构是在下游纯化过程屮形成的，对比有无硅胶纯化步骤，可??以推断硅胶有无促进颗粒形成的作用。冈此在疏水Ｕ析前加入硅胶步骤，利用ＨＰＳＥＣ??对两种纯化方式获得抗原颗粒进行完整性分析，若完整性提高，则表明硅胶具有促进??颗粒形成的作用。抗原完整分＋量大于２０００?....

图２．４丨ＩＢｓＡｇ颗粒稳定性分析??Ｆｉｇ．２．４?Ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＨＢｓＡｇ??

硅胶确实会促进ＨＢｓＡｇ的颗粒的形成，但是硅胶促进??形成的颗粒是否是稳定，还需要进一步的实验。十二烷基磺酸钠可以断开抗原亚基之??间的非共价键连接，组装完整的抗原颗粒会因此解聚形成分子量仅有２４?ＫＤａ的亚基，??因此分别向硅胶吸附／解吸附与疏水层析联用法和常规疏水层析法纯化得....

图３．８不同吸附ｐｉ?Ｉ对硅胶解吸附液中抗原颗粒占比的影响??Ｆｉｇ?３．８?Ｅｔｌｅｃｔ?ｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ?ｐＨ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ?ｏ?

?河北农业大学硕士学位（毕业）论文???３５?■?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ?＃??？?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ??３０－?ｖ?－＇??卜Ｖ?、??〇?？??Ｉ?２０＇?＿??１５?－??、＇嚇??Ｌ」—一．丄?．?，?—????５?６?７?８?９??Ａｄｓｏｒｐ....

本文编号：3899666