中国地鼠口腔黏膜癌发生发展相关microRNA的筛选鉴定与体外功能分析

发布时间：2023-11-11 09:24

　　目的:建立中国地鼠口腔黏膜癌动物模型,根据WHO的分级标准将动物模型中口腔黏膜癌的发展分为四个阶段:正常阶段(normal stage),单纯增生阶段(simple hyperplasia stage),异常增生阶段(abnormal hyperplasia stage),鳞癌阶段(squamous cell and invasive carcinoma,cancer);运用高通量测序技术和实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对中国地鼠口腔黏膜癌发生发展过程中的各个阶段进行测序并验证测序结果,构建各阶段microRNA(miRNA)表达谱,并预测其靶基因,进一步采用生物信息学的方法对其进行功能分析,筛选出癌变过程中可能发挥重要作用的关键GO条目、信号通路及可能的生物标志物。此外,通过体外细胞实验进一步明确候选基因miRNA-181a-5p对人类口腔鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和CAL-27生物学行为的影响,并对其靶基因和下游相关互作基因进行验证。从非编码RNA层面和基因表达的角度深入探究口腔鳞状细胞癌形成过程中可能存在的调控机制,揭示候选miRNA在肿瘤细胞凋亡、周期、增殖、迁...

【文章页数】：171 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
常用缩写词中英文对照表
前言
第一部分 中国地鼠口腔黏膜癌动物模型的建立
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 仪器与试剂
        1.3 实验方法
        1.4 统计分析
    2 结果
        2.1 肉眼观察
        2.2 HE病理鉴定
        2.3 透射电镜超微观结构观察
        2.4 AFP、TNF-ɑ、SCC-Ag的血清含量检测
    3 讨论
    4 结论
第二部分 口腔黏膜癌病变各阶段差异表达miRNA表达谱的构建与生物信息学分析
    1 材料与方法
        1.1 样品准备
        1.2 仪器与试剂
        1.3 实验方法
    2 结果
        2.1 组织RNA样本的质控
        2.2 测序数据过滤及质控
        2.3 差异表达miRNA的鉴定
        2.4 差异miRNA靶基因的预测与筛选
        2.5 GO富集分析
        2.6 KEGG富集分析
    3 讨论
    4 结论
第三部分 候选基因在各阶段口腔黏膜癌组织中的q RT-PCR验证
    1 材料与方法
        1.1 样品准备
        1.2 仪器与试剂
        1.3 实验方法
        1.4 统计分析
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
第四部分 miR-181a-5p对人类口腔鳞癌细胞系生物学行为的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 仪器与试剂
        1.3 实验方法
        1.4 统计分析
    2 结果
        2.1 qRT-PCR验证转染效率
        2.2 最佳转染条件的探究
        2.3 miR-181a-5p表达的改变调节OSCC细胞增殖
        2.4 miR-181a-5p对 OSCC细胞系平板克隆的影响
        2.5 miR-181a-5p对 OSCC细胞系周期的影响
        2.6 miR-181a-5p对 OSCC细胞系凋亡的影响
        2.7 miR-181a-5p对 OSCC细胞系侵袭的影响
        2.8 miR-181a-5p对 OSCC细胞系迁移的影响
    3 讨论
    4 结论
第五部分 miR-181a-5p靶向调控TIMP1 影响人类口腔鳞癌细胞的生物学功能
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 仪器与试剂
        1.3 实验方法
        1.4 统计分析
    2 结果
        2.1 miR-181a-5p靶基因的预测
        2.2 靶基因的互作与预后分析
        2.3 各处理组细胞中靶基因及其互作基因的表达验证
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
附录
致谢
个人简介



本文编号：3862365