缺氧对急性髓系白血病KG-1细胞生物学及基因甲基化的影响

发布时间：2023-10-19 18:31

　　目的:由于肿瘤细胞增殖过快普遍存在缺氧,而缺氧诱导的表观遗传改变可能是肿瘤细胞适应缺氧微环境的关键,是目前研究白血病重要发病机制之一。通过建立体外缺氧模型,研究缺氧对急性髓系白血病KG-1细胞增殖代谢影响、HIF-1α表达变化以及对基因组甲基化的影响,将肿瘤细胞缺氧代谢与表观遗传学联系起来,为急性白血病等血液系统恶性肿瘤的诊治研究提供了新的思路与实验依据。方法:1.以不同氧浓度(21%、3%、1%)处理急性髓系白血病细胞系KG-1细胞24、48、72小时,以常氧为对照组。用CCK-8法检测细胞活性,LDH试剂盒测定细胞培养基中LDH,以了解缺氧对KG-1细胞增殖代谢的影响。2.采用荧光实时定量PCR方法来检测HIF-1αmRNA表达,Western blot方法检测HIF-1α蛋白表达以了解缺氧对KG-1细胞中HIF-1α表达的影响。3.采用5-羟甲基化胞嘧啶(5-hmC)及5-甲基化胞嘧啶(5-mC)检测试剂盒检测5-hmC及5-mC含量,以了解缺氧及HIF-1α对KG-1细胞基因甲基化的影响。4.通过慢病毒感染HIF-1α真核表达质粒,使细胞过表达HIF-1α。实验分为慢病毒载体G...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
    1.1 缺氧微环境与白血病
    1.2 表观遗传学异常是白血病发病的重要机制
    1.3 缺氧在表观遗传改变中起着关键作用
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要引物
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 CCK-8法检测细胞活性
        2.2.3 细胞培养基中LDH的测定
        2.2.4 细胞总RNA提取
        2.2.5 逆转录cDNA的合成
        2.2.6 实时荧光定量PCR
        2.2.7 免疫印迹法(Western blot)
        2.2.8 慢病毒感染HIF-1α过表达
        2.2.9 化合物YC-1 抑制HIF-1α表达
        2.2.10 5-hmC含量测定
        2.2.11 基因组DNA中5-mC含量测定
        2.2.12 甲基化特异性PCR法(MSP)
        2.2.13 统计学方法
第三章 实验结果
    3.1 缺氧对急性髓系白血病KG-1细胞增殖及代谢的影响
        3.1.1 CCK-8方法检测细胞增殖活性结果
        3.1.2 细胞培养基中LDH测定结果
    3.2 缺氧对KG-1 细胞中HIF-1α表达的影响
        3.2.1 HIF-1α mRNA表达水平
        3.2.2 HIF-1α蛋白表达水平
    3.3 缺氧及HIF-1α对KG-1 细胞基因甲基化态势的影响
        3.3.1 缺氧对KG-1细胞基因组甲基化的影响
        3.3.2 HIF-1α过表达对KG-1 细胞基因组甲基化及P15 基因甲基化的影响
        3.3.3 HIF-1α抑制对KG-1 细胞基因组甲基化及P15 基因甲基化的影响
第四章 讨论
    4.1 缺氧对KG-1细胞增殖及代谢的影响
    4.2 缺氧对KG-1 细胞HIF-1α表达的影响
    4.3 缺氧对KG-1细胞甲基化的影响
第五章 结论
参考文献
综述
    参考文献
附录一
附录二
致谢



本文编号：3855175