基于p62-keap1/Nrf2通路研究六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用机制

发布时间：2023-08-11 20:08

　　目的:以氧化损伤ARPE-19细胞作为体外实验研究对象,观察六君子汤含药血清对氧化损伤细胞的保护作用;研究六君子汤对p62-keap1/Nrf2通路的调控作用,以阐明六君子汤保护氧化损伤细胞的机制。方法:用t-BHP(叔丁基过氧化氢)诱导ARPE-19细胞损伤。将ARPE-19细胞分成:正常对照组、模型对照组、空白血清组和六君子汤组(分为高、中、低三个剂量组)。采用MTT法和AnnexinV-FITC/PI法检测六君子汤含药血清对细胞存活率和凋亡率的影响;生化法检测SOD活性,DCFH-DA法检测细胞内ROS含量,western blot 检测 HO-1、NQO-1、p62、Nrf2、LC3Ⅱ蛋白表达。结果:1.相比于正常对照组,模型对照组细胞生存能力明显下降(p<0.01);与模型组相比,三个剂量六君子汤干预组ARPE-19细胞存活率明显提高(p<0.05)。2.相比于正常对照组,模型组的凋亡率显著增加;与模型组相比,三个剂量六君子汤干预组降低细胞的凋亡率。3.相比于正常对照组,模型组SOD活性下降,ROS含量增加(p<0.05);与模型组相比,三个剂量六君子汤干预...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一篇 理论研究
    1 中医对AMD的认识
        1.1 病名溯源
        1.2 病因病机
        1.3 症候特征
        1.4 中医治疗
    2 西医对AMD的认识
        2.1 临床特征及分类
        2.2 病因及发病机制
        2.3 西医治疗
    3 六君子汤的相关研究
        3.1 来源与组成
        3.2 中医研究
        3.3 西医研究
    4 本研究的目的和意义
第二篇 实验研究
    1、实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 饲料、垫料及饲养环境
        1.3 实验药物
        1.4 实验细胞
        1.5 主要仪器及设备
        1.6 实验试剂
    2. 实验方法
        2.1 含药血清制备
        2.2 实验试剂配制
        2.3 细胞实验方法
        2.4 MTT法检测ARPE-19细胞的存活率
        2.5 细胞分组
        2.6 流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法检测ARPE-19细胞的凋亡率
        2.7 细胞内SOD活性及ROS含量的检测
        2.8 western blot检测p62、Nrf2及其相关靶基因的蛋白表达
        2.9 siRNA转染ARPE-19细胞
    3、统计分析
    4、实验结果
        4.1 六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞形态的影响
        4.2 ARPE-19细胞氧化损伤模型的建立
        4.3 不同浓度的六君子汤对ARPE-19细胞的毒性
        4.4 六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞存活率的影响
        4.5 六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞凋亡率的影响
        4.6 六君子汤对氧化损伤ARPE-19细胞内SOD活性及ROS含量的影响
        4.7 六君子汤及t-BHP对ARPE-19细胞Nrf2表达水平的影响
        4.8 Nrf2其下游HO-2、NQO-1、LC3Ⅱ、P62蛋白的表达水平
    5、讨论
全文总结
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3841676