CD137-CD137L信号通过调控自噬促进ApoE -/- 小鼠斑块钙化形成

发布时间：2023-07-25 00:27

　　目的探讨CD137信号是否通过抑制自噬小体与溶酶体融合促进动脉粥样斑块钙化的形成。方法实验分别采用ApoE^-/-小鼠和组织贴块法原代培养小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)为模型,30只ApoE^-/-小鼠和原代VSMCs随机分三组:对照组:炎症因子混合物预刺激(TNF-α,IL-1β,INF-γ各10 ng/ml);CD137激动组:对照组+重组CD137L蛋白;CD137抑制组:对照组+抑制型CD137抗体+重组CD137L蛋白。vonKossa染色评估细胞及斑块钙化程度,免疫组织化学染色检测ApoE^-/-小鼠斑块中自噬相关蛋白LC3B、Beclin 1及p62的表达水平。采用Western blot检测细胞内钙化及自噬相关蛋白BMP-2、Runx2、LC3I/II及p62的表达水平,应用自噬双标腺病毒感染小鼠主动脉平滑肌细胞,标记LC3蛋白,荧光倒置显微镜下观察自噬流情况,通过透射电子电镜观察小鼠斑块内及小鼠平滑肌细胞内的自噬小体的形成。结果(1)重组CD137L蛋白激动CD137信号后,Western blot显示:...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 动脉粥样硬化和急性冠脉综合征
        1.1.2 CD137信号与动脉粥样硬化
        1.1.3 自噬与动脉粥样硬化
        1.1.4 血管钙化及与动脉粥样硬化
        1.1.5 CD137可能调控自噬启动微钙化
    1.2 研究的目的意义、内容与技术路线
        1.2.1 研究目的意义
        1.2.2 研究内容
        1.2.3 技术路线
第二章 CD137信号通过调控自噬促进ApoE^-/-小鼠斑块钙化形成
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 主要溶液及成份
        2.1.4 手术器械
        2.1.5 实验动物
    2.2 方法
        2.2.1 改良的组织贴块法获取原代小鼠VSMCs
        2.2.2 免疫荧光染色法鉴定原代VSMC性质
        2.2.3 VSMCs中CD137的诱导
        2.2.4 构建ApoE^-/-小鼠AS模型及动物分组处理
        2.2.5 细胞分组及细胞处理
        2.2.6 免疫组织化学染色
        2.2.7 mRFP-GRP-LC3双标腺病毒感染细胞
        2.2.8 流式细胞术检测自噬
        2.2.9 细胞蛋白的提取及Western蛋白印迹
        2.2.10 透射电镜观察斑块及体外培养的VSMC中的自噬小体
        2.2.11 细胞及组织vonKossa钙化染色
        2.2.12 统计学方法
    2.3 结果
        2.3.1 原代细胞培养及鉴定
        2.3.2 CM诱导VSMCs表达CD137分子上调
        2.3.3 CD137信号对ApoE^-/-小鼠粥样斑块自噬的影响
        2.3.4 CD137信号对VSMCs自噬的影响
        2.3.5 CD137信号对ApoE^-/-小鼠粥样斑块钙化的影响
        2.3.6 CD137信号对VSMCs钙化的影响
    2.4 讨论
第三章 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3836808