共表达细胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）的构建及其功能研究

发布时间：2023-04-17 05:21

　　嵌合抗原受体 T 细胞治疗(Chimeric antigen receptor T cell therapy,CAR-T therapy)是一种新兴的肿瘤免疫治疗,该疗法是通过对患者体内的T细胞进行改造,在T细胞膜上表达一种肿瘤特异性的嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptors,CARs),使其能够通过肿瘤特异性的、非MHC分子依赖性的途径激活,从而发挥抗肿瘤作用。CAR是一种跨膜受体,主要由胞外识别结构域、跨膜区和胞内激活结构域组成,其胞外识别结构域通常为肿瘤细胞特征性表面分子的单链抗体(single^chain variable fragment,scFv),胞内激活结构域为T细胞受体(T cell receptor,TCR)的CD3zeta片段,当CAR胞外的单链抗体与肿瘤细胞识别、结合,即可激活CD3zeta,进而直接激活T细胞。至今已发展出三代CAR,其中第二代CAR是研究最多、最具应用前景的CAR,第二代CAR分子在跨膜区和激活结构域之间还偶联了一个T细胞共刺激分子,如CD28、4-1BB等,在共刺激分子的协同作用下,CAR-T细...

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 嵌合抗原受体T细胞
    2 细胞因子IL-18和IL-21
    3 慢病毒载体表达系统
    4 本研究的目的和意义
第二章 共表达细胞因子IL-18或IL-21的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的构建及其功能研究
    引言
    一、材料
        1 细胞
        2 菌株及质粒
        3 主要试剂
        4 实验器材
        5 实验常用试剂配制
    二、方法
        1 人全长细胞因子IL-18和IL-21序列的体外克隆
        2 共表达IL-18或IL-21的CAR分子的重组慢病毒表达载体的构建
        3 慢病毒包装
        4 JurCAR-T细胞制备
        5 JurCAR-T细胞功能检测
        6 细胞杀伤实验
        7 人脐带血淋巴细胞CAR-T细胞制备
    三、结果
        1 αCD19scFv、4-1BB-CD3zeta的克隆及拼接
        2 IL-18、IL-21、IRES序列的克隆及拼接
        3 慢病毒V-CAR19、V-CAR19-IL-18、V-CAR19-IL-21的制备
        4 JurCAR-T (JurCAR19、JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21)细胞的制备
        5 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞IFN-γ表达情况检测
        6 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外增殖能力检测
        7 JurCARI9-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞体外杀伤功能检测
        8 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞活化水平检测
        9 JurCAR19-IL-18、JurCAR19-IL-21细胞激活后体外增殖能力检测
        10 CAR-T细胞制备
        11 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞体外杀伤功能检测
        12 CAR19-IL18-T、CAR19-IL21-T细胞活化水平检测
    四、讨论
第三章 结论
附录
参考文献
致谢



本文编号：3792656