miR-205-5p通过PI3K/AKT信号通路靶向PTEN调节耐顺铂鼻咽癌细胞的上皮-间质转化

发布时间：2023-04-08 03:35

　　目的:上皮-间质转化(EMT)与肿瘤的发生及一系列恶性进展密切相关,micro RNA(mi RNA)可通过调节相关基因调控EMT。本研究主要观察mi R-205-5p对耐顺铂鼻咽癌细胞EMT的调控作用,并明确其作用机制,以期为开辟新的鼻咽癌临床治疗途径提供理论和实验依据。方法:1.mi RNA芯片技术检测耐顺铂鼻咽癌HNE1/DDP细胞和敏感株细胞HNE1中mi RNAs表达的变化,筛选出表达差异显著的mi RNAs,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)进行验证;2.用Lipofectamine 2000将mi R-205-5p mimic或mi R-205-5p inhibitor转染HNE1细胞或HNE1/DDP细胞,以改变细胞内mi R-205-5p的表达水平;3.MTT法检测鼻咽癌细胞增殖及存活情况;集落克隆形成实验检测细胞集落形成能力;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;4.划痕愈合实验检测细胞水平运动能力;Transwell小室实验检测细胞的体外迁移及侵袭能力;5.倒置显微镜观察细胞生物学形态的变化;Western blot及q RT-PCR检...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1.材料与仪器
        1.1 细胞系
        1.2 试剂
        1.3 实验仪器
    2.实验方法
        2.1 细胞的培养与冻存
        2.2 细胞转染
        2.3 MTT实验
        2.4 Annexin V/PI双染实验
        2.5 集落克隆形成实验
        2.6 侵袭与迁移实验
        2.7 免疫印迹(Western blot)实验
        2.8 q RT-PCR
        2.9 荧光素酶报告实验
    3.统计学分析
结果
    1.HNE1/DDP细胞对顺铂具有耐药性
    2.HNE1/DDP细胞中miR-205-5p高表达
    3.调控鼻咽癌细胞中miR-205-5p的表达
    4.miR-205-5p促进鼻咽癌细胞增殖
    5.miR-205-5p抑制剂增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性
    6.miR-205-5p促进鼻咽癌细胞侵袭迁移
    7.miR-205-5p促进鼻咽癌细胞EMT进程
    8.PTEN是 miR-205-5p的下游靶基因
    9.PI3K/AKT信号通路参与miR-205-5p的调控作用
    10.敲低PTEN可促进鼻咽癌细胞增殖
    11.敲低PTEN拮抗miR-205-5p抑制剂的作用
    12.miR-205-5p通过PI3K/AKT信号通路调控EMT
讨论
结论
参考文献
致谢
附录 A 中英文术语缩略词表
附录 B 常用试剂配制方法
附录 C 个人简历
附录 D miR-205-5p在肿瘤中的研究进展综述
    参考文献



本文编号：3785922