转录因子Lhx9和Lhx4在斑马鱼胚胎发生中的表达模式及其在视网膜发育中的功能研究

发布时间：2022-10-19 18:28

　　许多人类遗传性疾病都与LIM-同源异形框（LIM homeobox,LHX）基因有关。目前关于Lhx9和Lhx4在脊椎动物胚胎发育过程中的功能研究尚不完整,主要源于对其在胚胎发育中的时空表达模式不够清楚。此外,研究发现80%以上Lhx基因与视网膜的发育有关。然而,目前尚无研究报道Lhx9和Lhx4在斑马鱼视网膜中的表达模式和调控功能。本课题首先通过利用整胚原位杂交和切片原位杂交检测lhx9和lhx4在斑马鱼胚胎及视网膜发育中的表达模式。结果发现在24hpf到5dpf的斑马鱼胚胎中,lhx9和lhx4的表达随胚胎发育均呈动态变化。lhx9不但在大脑中表达,而且在视网膜内核层的内侧,心脏和胸鳍的发育过程中有较长时期的表达;lhx4不但在斑马鱼胚胎的大脑和脊髓中表达,而且在听囊发育的早期瞬时表达,在视网膜发育的后期lhx4持续在内核层的外侧和外核层表达。本课题通过morpholino（MO）技术成功构建了敲减lhx9或lhx4的斑马鱼模型,结果发现MO敲减lhx9不影响斑马鱼视网膜内不同类型细胞的分化发育以及视网膜结构和功能的发育。MO敲减lhx4导致斑马鱼胚胎出现类似人类遗传性垂体疾病（如... 

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 斑马鱼的研究进展
    1.2 斑马鱼视网膜的研究进展
    1.3 LIM-HD转录因子在视网膜发育中的研究进展
    1.4 研究目的和意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 实验仪器
    2.3 主要试剂及配制
    2.4 配鱼和收集鱼卵
    2.5 核酸提取和荧光定量PCR
    2.6 制备核酸探针
    2.7 整胚原位杂交
    2.8 切片原位杂交
    2.9 斑马鱼胚胎的显微注射
    2.10 斑马鱼形态学观察
    2.11 免疫荧光染色
    2.12 光刺激反应行为学
    2.13 统计分析
第三章 lhx9和lhx4 在斑马鱼胚胎发生中的表达模式
    3.1 lhx9 在斑马鱼胚胎发生中的表达模式
    3.2 lhx9 在斑马鱼视网膜发生中的表达模式
    3.3 lhx4 在斑马鱼胚胎发生中的表达模式
    3.4 lhx4 在斑马鱼视网膜发生中的表达模式
第四章 Lhx9 在斑马鱼视网膜发育中的功能研究
    4.1 MO敲减lhx9 斑马鱼模型的构建
    4.2 MO敲减lhx9 对斑马鱼胚胎形态发育的影响
    4.3 MO敲减lhx9 对斑马鱼视网膜发育的影响
    4.4 MO敲减lhx9 对斑马鱼视网膜细胞凋亡和增殖的影响
    4.5 MO敲减lhx9 对斑马鱼光刺激反应的影响
第五章 Lhx4 在斑马鱼视网膜发育中的功能研究
    5.1 MO敲减lhx4 斑马鱼模型的构建
    5.2 MO敲减lhx4 对斑马鱼胚胎形态发育的影响
    5.3 MO敲减lhx4 对斑马鱼视网膜发育的影响
    5.4 MO敲减lhx4 对斑马鱼视网膜细胞凋亡的影响
    5.5 MO敲减lhx4 对斑马鱼光刺激反应的影响
    5.6 vivo-MO敲减视网膜内lhx4 斑马鱼模型的构建
    5.7 vivo-MO敲减视网膜内lhx4 对胚胎形态发育的影响
    5.8 vivo-MO敲减视网膜内lhx4 对视网膜发育的影响
    5.9 vivo-MO敲减视网膜内lhx4 对视网膜内细胞凋亡的影响
    5.10 vivo-MO敲减视网膜内lhx4 对斑马鱼光刺激反应的影响
第六章 讨论与结论
    6.1 讨论与展望
    6.2 结论
第七章 本论文的创新点
参考文献
附录
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]以斑马鱼为疾病模型的小分子药物筛选研究进展[J]. 赵呈天,贾硕,张晓丽.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2019(09)
[2]斑马鱼:在生命科学中畅游[J]. 孙智慧,贾顺姬,孟安明.  生命科学. 2006(05)



本文编号：3693886