IFNβ和BMP信号通路协同调控人源神经干细胞静息激活的研究
发布时间：2021-12-19 04:54
研究背景:成体神经干细胞通常是以静息和激活两种可互相转换但截然不同的状态存在。神经干细胞静息/激活一旦失衡可能导致衰老和病理条件下神经再生的异常,造成脑机能减退、认知能力受损、神经退行性疾病以及肿瘤的发生。研究发现脑组织损伤后,静息的神经干细胞被大量激活,迅速增殖,以实现神经再生和维持正常脑功能。但过度的增殖,往往造成干细胞库的耗竭,导致神经再生能力的永久丧失。机体如何调控脑组织损伤后静息/激活之间的平衡,以维持干细胞库的稳态,保证持久的神经再生能力,促进组织损伤修复是目前研究的热点。有研究表明脑缺血损伤或病毒感染时内源性干扰素表达增加,诱导静息干细胞激活,促进干细胞增殖,实现组织损伤后修复;另一方面已证实骨形成蛋白（BMP）信号通路能够维持包括成体神经干细胞在内的多种干细胞静息,实现干细胞库的稳态。BMP在神经干细胞静息激活中发挥重要作用。抑制BMP信号通路可部分恢复老年小鼠神经干细胞增殖能力,促进神经再生,逆转衰老诱发的脑病变。Ⅰ型干扰素家族成员干扰素β（IFNβ）作为免疫调节细胞因子,在脑环境稳态维持、衰老和神经退行性疾病的调节中发挥重要作用。阻断脑内Ⅰ型干扰素信号通路可部分恢复...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ｈＮＳＣ神经干性鉴定??Ａ：?ｈＮＳＣ?ＳＯＸ２免疫荧光染色结果Ｂ：?ｈＮＳＣ?ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光染色结果标尺＝５０?ｎ?ｍ??
?山西医科大学博士学位论文???Ａ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｂｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??Ｂ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｈｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??图１－２?ｈＮＳＣ多向分化能力的鉴定??Ａ：诱导神经分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免疫荧光染色结果Ｂ：诱导胶质分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免??疫荧光染色结果标尺＝５０?ｕ?ｍ??Ｆｉｇ?１－２?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?ａｂｏｕｔ?ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ??Ａ：?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ｎｅｕｒｏｎ，?Ｂ：??Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅ，?Ｂａｒ＝５０｜ｊｉｎ??干细胞定向分化能力的评判指标［２９］。通过ｌ｜ｉＭ?ＲＡ＋?５｜ｉＭ?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、５０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４??＋１０４?ｕｎｉｔｓ?ＬＩＦ分别诱导神经千细胞向神经元和胶质细胞分化，细胞Ｔｕｊｌ和Ｓ１００－??ｂｅｔａ免疫荧光染色显示神经于细胞是否定向分化为神经元或胶质细胞，从而判断神经??千细胞是否具有多向分化潜能。图１－２Ａ结果显示在ＲＡ＋?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ处理下大部分细??胞为Ｔｕｊｌ免疫染色强阳性，说明人源神经千细胞可以诱导分化为神经元。图１－２Ｂ结??果显示在ＢＭＰ４?＋?ＬＩＦ处理下大部分细胞表现为Ｓ１００－ｂ
ｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）处理ｈＮＳＣ?５天后，结果显示，ＦＧＦ组细胞胞体??小，立体发亮．，颜色发黑，细胞正常生长；ＢＭＰ４处理的细胞都发生形态变化，体积??变大，颜色变浅，伸出细长突起（＿１－３）。与ＦＧＦ对照组相比，ＢＭＰ４处理细胞数??目均减少，２０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４处理细胞数目减少显著。??２０ｎｇ／ｍｌ?ＦＧＦ?和?２?种浓度?ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）配比处理?ｈＮＳＣ?５?天后，结果??显示，２种浓度ＢＭＰ４处理均能改变细胞形态，细胞变化与之前一致（图１－３）。再??一次说明神经千细胞对ＢＭＰ４处理产生了反应。２种浓度ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）??与高浓度ＦＧＦ配比均能使细胞数目减少。结果提示ＢＭＰ４抑制人源神经干细胞的生??长．ａ??ＢＭＰ?４??ｎｇ／ｍｌ?２（）ｎ＾ｍｌ?５０?叩／ｍｌ??■■■??１—??图１－３?ＢＭＰ４与ＦＧＦ不同配比对ｈＮＳＣ细胞形态的影响标尺＝５０叫ｉ??Ｆｉｇ?１－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＢＭＰ４／?ＦＧＦ?ｏｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?Ｂａｒ＝５０｜ｘｍ??２．２．２?ＢＭＰ４对ｈＮＳＣ细胞周期的影卩向??既然ＢＭＰ４囡＇子的加入使得细胞形态改变，生长减慢，那么是否对细胞周期产生??擧响？为解决■上述问．题，我们收：集正常生长和ＢＭＰ４处理的细胞、，扉定＊用Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ??ｉｏｄｉｄｅ染料染色，流式细胞分析检测细胞周期的变化。从流式分析图发现，正常增殖??的人源神经千细胞〇３－＆期所在的峰（第一个红色的峰）峰值低，面积小，说明处于??这个时期的细胞数少，而且Ｇ２／Ｍ期所在的峰可见，具有一定的
本文编号：3543801
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ｈＮＳＣ神经干性鉴定??Ａ：?ｈＮＳＣ?ＳＯＸ２免疫荧光染色结果Ｂ：?ｈＮＳＣ?ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光染色结果标尺＝５０?ｎ?ｍ??
?山西医科大学博士学位论文???Ａ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｂｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??Ｂ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｈｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??图１－２?ｈＮＳＣ多向分化能力的鉴定??Ａ：诱导神经分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免疫荧光染色结果Ｂ：诱导胶质分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免??疫荧光染色结果标尺＝５０?ｕ?ｍ??Ｆｉｇ?１－２?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?ａｂｏｕｔ?ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ??Ａ：?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ｎｅｕｒｏｎ，?Ｂ：??Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅ，?Ｂａｒ＝５０｜ｊｉｎ??干细胞定向分化能力的评判指标［２９］。通过ｌ｜ｉＭ?ＲＡ＋?５｜ｉＭ?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、５０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４??＋１０４?ｕｎｉｔｓ?ＬＩＦ分别诱导神经千细胞向神经元和胶质细胞分化，细胞Ｔｕｊｌ和Ｓ１００－??ｂｅｔａ免疫荧光染色显示神经于细胞是否定向分化为神经元或胶质细胞，从而判断神经??千细胞是否具有多向分化潜能。图１－２Ａ结果显示在ＲＡ＋?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ处理下大部分细??胞为Ｔｕｊｌ免疫染色强阳性，说明人源神经千细胞可以诱导分化为神经元。图１－２Ｂ结??果显示在ＢＭＰ４?＋?ＬＩＦ处理下大部分细胞表现为Ｓ１００－ｂ
ｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）处理ｈＮＳＣ?５天后，结果显示，ＦＧＦ组细胞胞体??小，立体发亮．，颜色发黑，细胞正常生长；ＢＭＰ４处理的细胞都发生形态变化，体积??变大，颜色变浅，伸出细长突起（＿１－３）。与ＦＧＦ对照组相比，ＢＭＰ４处理细胞数??目均减少，２０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４处理细胞数目减少显著。??２０ｎｇ／ｍｌ?ＦＧＦ?和?２?种浓度?ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）配比处理?ｈＮＳＣ?５?天后，结果??显示，２种浓度ＢＭＰ４处理均能改变细胞形态，细胞变化与之前一致（图１－３）。再??一次说明神经千细胞对ＢＭＰ４处理产生了反应。２种浓度ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）??与高浓度ＦＧＦ配比均能使细胞数目减少。结果提示ＢＭＰ４抑制人源神经干细胞的生??长．ａ??ＢＭＰ?４??ｎｇ／ｍｌ?２（）ｎ＾ｍｌ?５０?叩／ｍｌ??■■■??１—??图１－３?ＢＭＰ４与ＦＧＦ不同配比对ｈＮＳＣ细胞形态的影响标尺＝５０叫ｉ??Ｆｉｇ?１－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＢＭＰ４／?ＦＧＦ?ｏｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?Ｂａｒ＝５０｜ｘｍ??２．２．２?ＢＭＰ４对ｈＮＳＣ细胞周期的影卩向??既然ＢＭＰ４囡＇子的加入使得细胞形态改变，生长减慢，那么是否对细胞周期产生??擧响？为解决■上述问．题，我们收：集正常生长和ＢＭＰ４处理的细胞、，扉定＊用Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ??ｉｏｄｉｄｅ染料染色，流式细胞分析检测细胞周期的变化。从流式分析图发现，正常增殖??的人源神经千细胞〇３－＆期所在的峰（第一个红色的峰）峰值低，面积小，说明处于??这个时期的细胞数少，而且Ｇ２／Ｍ期所在的峰可见，具有一定的
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