DHAV-1感染诱导内质网应激反应的信号通路研究
发布时间：2021-11-27 22:44
1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1）属于小RNA病毒科,禽肝病毒属,主要引起13周龄雏鸭发生鸭病毒性肝炎（Duck viral hepatitis,DVH）,致死率高达90%。DHAV-1感染雏鸭后引起多个脏器的细胞发生凋亡,特别是肝脏细胞的大量急性凋亡与特征性肝脏出血性坏死,给养鸭业带来巨大的经济损失。内质网（endoplasmic reticulum,ER）是真核细胞的蛋白工厂,主要负责蛋白的正确折叠与加工,也是病毒复制的主要场所之一。在病毒复制过程中,会产生大量的病毒蛋白,当它们不能被正确的折叠修饰和及时输出时,可启动内质网应激反应（ER stress response,ERSR）,进而诱导未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）,恢复其稳态。自噬发挥类似ERS的补充机制,可降解细胞中的蛋白质和废物等,维持稳态的细胞过程。ERS在许多病毒感染中发挥作用,不仅与病毒增殖和细胞凋亡有关,而且还可以调控细胞自噬水平。本研究主要针对DHAV-1感染后诱导的ERS及其介导的自噬、...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：168 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ER的3条应激通路(Shenetal.,2004)
山东农业大学博士学位论文17图1-2UPR分支图及其与自噬的关系(Jhengetal.,2014)。Figure1-2UPRbranchmapanditsrelationshipwithautophagy注：红色虚线箭头表示由病毒感染引起的激活途径的最终结果，例如细胞凋亡和自噬；而红色实心箭头表示UPR路径Note:Reddashedarrowsindicatetheendresultsofactivationpathwayscausedbyviralinfections,suchasapoptosisandautophagy,whereasredsolidarrowindicatesUPRpathways研究表明通过基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus,CHIKV）感染诱导的完全自噬诱导是由内质网和氧化应激途径的独立诱导介导的；敲低IRE1或使用ROS抑制剂N乙酰基-1-半胱氨酸抑制处理细胞也抑制自噬体的形成以及LC3-I向LC3-II的转化，证明经IRE1mRNA沉默和用N-乙酰基-1-半胱氨酸处理的细胞会抑制自噬体的形成（Joubertetal.,2012）。研究证实许多与UPR相关的转录因子调控Atg表达，ATF4的靶蛋白有LC3、Sequestosome1（p62/SQSTM）和ULK1（B"Chiretal.,2013;Milanietal.,2009;Pikeetal.,2013;Rouschopetal.,2010）；CHOP的靶蛋白有ATF5、LC3和p62/SQSTM1（B"Chiretal.,2013;Rouschopetal.,2010;Wangetal.,2014a）；ATF6的靶蛋白有死亡相关蛋白激酶1（DeathassociatedproteinKinase1,DAPK1）（Gadeetal.,2012）；C/EBPβ的靶蛋白有DAPK1、ATG4B和ULK1（Gadeetal.,2008;Guoetal.,2013;Maetal.,2011）；胆固醇调节元件结合蛋白（Sterolregulatoryelement-bindingproteins,SREBP2）对应的靶蛋白
DHAV-1感染诱导内质网应激反应的信号通路研究30分离。（6）数据库搜索：运用Maxquant(v1.5.2.8)对二级质谱数据进行检索。（7）生物信息学分析：GO分析、蛋白结构域、KEGG通路分析、亚细胞定位等。图2-1蛋白质组测序流程Figure2-1Procedureofproteomicssequencing2.3.1样品制备2.3.1.1细胞样品的准备随机制备并培养3批次DEF细胞，用10%完全培养基悬浮细胞并接种6cm细胞培养皿中，于37℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞单层铺满达70%~90%左右，用PBS轻轻漂洗2次，加入病毒液（以感染复数（multiplicityofinfection,MOI）为2.0TCID50/细胞接种），37℃吸附2h，吸附结束后用PBS漂洗2次，换入2%的细胞维持液，继续培养。同时，设不接种病毒的细胞组为阴性对照，其他处理同病毒感染组。感染48h时，分别收集DHAV-1感染组（简称为D）和未感染的DEF细胞(简称为N)。每组设立3个生物学重复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Coxsackievirus B3 Infection Triggers Autophagy through 3 Pathways of Endoplasmic Reticulum Stress[J]. LUO Xiao Nuan,YAO Hai Lan,SONG Juan,SONG Qin Qin,SHI Bing Tian,XIA Dong,HAN Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(12)
[2]鸭甲型肝炎病毒1型抗体CLEIA检测方法的建立[J]. 银凤桂,侯力丹,魏艳秋,杨宝芝,李芸,李晶,张爽,刘文军,杨利敏. 中国预防兽医学报. 2017(06)
[3]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[4]鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究[J]. 陈志胜,王丙云,潘忠雄,蔡巧奕,顾万军. 中国兽医学报. 2003(02)
[5]试验感染鸭病毒性肝炎雏鸭的组织病理学研究[J]. 胡薛英,程国富,周诗其,熊道焕. 华中农业大学学报. 2000(01)
[6]鸭病毒性肝炎病毒细胞培养技术的研究[J]. 罗函禄,范文明,张菊英,刘建平. 江苏农业科学. 1996(06)
[7]鸭病毒性肝炎的研究——Ⅰ.鸭病毒性肝炎病毒的纯化及电镜观察[J]. 罗函禄,徐汉祥,范文明,潘乃珍. 中国畜禽传染病. 1990(03)
博士论文
[1]新型鸭肝炎病毒致病特性及感染鸭肝胰细胞凋亡的研究[D]. 胡薛英.中国农业大学 2005
本文编号：3523187
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：168 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ER的3条应激通路(Shenetal.,2004)
山东农业大学博士学位论文17图1-2UPR分支图及其与自噬的关系(Jhengetal.,2014)。Figure1-2UPRbranchmapanditsrelationshipwithautophagy注：红色虚线箭头表示由病毒感染引起的激活途径的最终结果，例如细胞凋亡和自噬；而红色实心箭头表示UPR路径Note:Reddashedarrowsindicatetheendresultsofactivationpathwayscausedbyviralinfections,suchasapoptosisandautophagy,whereasredsolidarrowindicatesUPRpathways研究表明通过基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus,CHIKV）感染诱导的完全自噬诱导是由内质网和氧化应激途径的独立诱导介导的；敲低IRE1或使用ROS抑制剂N乙酰基-1-半胱氨酸抑制处理细胞也抑制自噬体的形成以及LC3-I向LC3-II的转化，证明经IRE1mRNA沉默和用N-乙酰基-1-半胱氨酸处理的细胞会抑制自噬体的形成（Joubertetal.,2012）。研究证实许多与UPR相关的转录因子调控Atg表达，ATF4的靶蛋白有LC3、Sequestosome1（p62/SQSTM）和ULK1（B"Chiretal.,2013;Milanietal.,2009;Pikeetal.,2013;Rouschopetal.,2010）；CHOP的靶蛋白有ATF5、LC3和p62/SQSTM1（B"Chiretal.,2013;Rouschopetal.,2010;Wangetal.,2014a）；ATF6的靶蛋白有死亡相关蛋白激酶1（DeathassociatedproteinKinase1,DAPK1）（Gadeetal.,2012）；C/EBPβ的靶蛋白有DAPK1、ATG4B和ULK1（Gadeetal.,2008;Guoetal.,2013;Maetal.,2011）；胆固醇调节元件结合蛋白（Sterolregulatoryelement-bindingproteins,SREBP2）对应的靶蛋白
DHAV-1感染诱导内质网应激反应的信号通路研究30分离。（6）数据库搜索：运用Maxquant(v1.5.2.8)对二级质谱数据进行检索。（7）生物信息学分析：GO分析、蛋白结构域、KEGG通路分析、亚细胞定位等。图2-1蛋白质组测序流程Figure2-1Procedureofproteomicssequencing2.3.1样品制备2.3.1.1细胞样品的准备随机制备并培养3批次DEF细胞，用10%完全培养基悬浮细胞并接种6cm细胞培养皿中，于37℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞单层铺满达70%~90%左右，用PBS轻轻漂洗2次，加入病毒液（以感染复数（multiplicityofinfection,MOI）为2.0TCID50/细胞接种），37℃吸附2h，吸附结束后用PBS漂洗2次，换入2%的细胞维持液，继续培养。同时，设不接种病毒的细胞组为阴性对照，其他处理同病毒感染组。感染48h时，分别收集DHAV-1感染组（简称为D）和未感染的DEF细胞(简称为N)。每组设立3个生物学重复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Coxsackievirus B3 Infection Triggers Autophagy through 3 Pathways of Endoplasmic Reticulum Stress[J]. LUO Xiao Nuan,YAO Hai Lan,SONG Juan,SONG Qin Qin,SHI Bing Tian,XIA Dong,HAN Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(12)
[2]鸭甲型肝炎病毒1型抗体CLEIA检测方法的建立[J]. 银凤桂,侯力丹,魏艳秋,杨宝芝,李芸,李晶,张爽,刘文军,杨利敏. 中国预防兽医学报. 2017(06)
[3]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[4]鸭肝炎病毒诱导雏鸭细胞凋亡的研究[J]. 陈志胜,王丙云,潘忠雄,蔡巧奕,顾万军. 中国兽医学报. 2003(02)
[5]试验感染鸭病毒性肝炎雏鸭的组织病理学研究[J]. 胡薛英,程国富,周诗其,熊道焕. 华中农业大学学报. 2000(01)
[6]鸭病毒性肝炎病毒细胞培养技术的研究[J]. 罗函禄,范文明,张菊英,刘建平. 江苏农业科学. 1996(06)
[7]鸭病毒性肝炎的研究——Ⅰ.鸭病毒性肝炎病毒的纯化及电镜观察[J]. 罗函禄,徐汉祥,范文明,潘乃珍. 中国畜禽传染病. 1990(03)
博士论文
[1]新型鸭肝炎病毒致病特性及感染鸭肝胰细胞凋亡的研究[D]. 胡薛英.中国农业大学 2005
本文编号：3523187
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