NQO1抑制剂Dicoumarol调控HBx稳定性对乙肝病毒转录复制的重要作用
发布时间：2021-08-11 06:36
目的1.明确NQO1抑制剂DIC对HBV转录复制的调控作用。2.解析NQO1调控HBx蛋白稳定性的分子机制。3.阐明NQO1稳定HBx蛋白对ccc DNA转录和HBV复制过程的重要作用。4.探究NQO1/HBx调控ccc DNA转录的分子机制。5.体内实验充分评估NQO1抑制剂DIC的抗HBV效能。方法1.利用Nano-Glo?Hi Bi T Lytic Detection System评估NQO1抑制剂DIC对病毒蛋白HBx表达水平的调控作用;Western blot检测DIC对外源性和内源性HBx蛋白水平的影响。2.在HBV感染的Hep G2-NTCP中,使用不同浓度的DIC处理细胞:real-time PCR（RT-PCR）检测total HBV RNAs和pg RNA的水平;Northern blot检测HBV 3.5-kb和2.1/2.4-kb RNA水平;Quantitative real-time PCR（q RT-PCR）检测HBV ccc DNA水平。3.在Hep G2细胞中敲减/敲除或过表达NQO1,共转染HBx:Western blot和RT-PCR检测HBx蛋白...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：139 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HiBiT裂解检测系统检测DIC对HiBiT-HBx表达的影响
Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响
重庆医科大学博士研究生学位论文41于96孔板后，使用不同浓度的Dicoumarol(DIC)处理细胞72h，MTT实验检测DIC对细胞活性的影响。结果显示，与对照组比较，DIC的CC50均大于400μM；且在HepG2-NTCP、HepAD38和HepG2等3种细胞中CC50大于800μM，以上结果说明DIC的细胞毒性较小（图1.2）。图1.2MTT实验检测DIC对细胞活性的影响Figure1.2EffectsofDIConcellviabilityweredeterminedbyMTTassay.2.2Dicoumarol对HBx表达的影响2.2.1Dicoumarol对外源性HBx表达的影响为了进一步探究DIC对HBx表达的影响，我们接下来在HepG2细胞中分别转染了3×Flag-HBx和2×HA-HBx后，采用不同浓度的DIC处理，westernblot检测HBx蛋白水平发现，DIC可显著抑制外源性HBx蛋白的表达（图1.3）。图1.3Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响Figure1.3TheeffectofDIContheexpressionlevelofexogenousHBxwasdeterminedbyusingwesternblot.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inactivated Sendai Virus Induces ROS-dependent Apoptosis and Autophagy in Human Prostate Cancer Cells[J]. QIAN Miao,TAN Hai Ming,YU Ning,WANG Tao,ZHANG Quan. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(04)
[2]Hepatitis B surface antigen clearance in inactive hepatitis B surface antigen carriers treated with peginterferon alfa-2a[J]. Ming-Hui Li,Yao Xie,Lu Zhang,Yao Lu,Ge Shen,Shu-Ling Wu,Min Chang,Cai-Qin Mu,Lei-Ping Hu,Wen-Hao Hua,Shu-Jing Song,Shu-Feng Zhang,Jun Cheng,Dao-Zhen Xu. World Journal of Hepatology. 2016(15)
[3]Overview of hepatitis B virus mutations and their implications in the management of infection[J]. Patrizia Caligiuri,Rita Cerruti,Giancarlo Icardi,Bianca Bruzzone. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[4]Hepatitis B viral load affects prognosis of hepatocellular carcinoma[J]. Su Jong Yu,Yoon Jun Kim. World Journal of Gastroenterology. 2014(34)
[5]HBV cccDNA in patients’ sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage[J]. Johnny Sze. World Journal of Gastroenterology. 2004(01)
本文编号：3335659
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：139 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HiBiT裂解检测系统检测DIC对HiBiT-HBx表达的影响
Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响
重庆医科大学博士研究生学位论文41于96孔板后，使用不同浓度的Dicoumarol(DIC)处理细胞72h，MTT实验检测DIC对细胞活性的影响。结果显示，与对照组比较，DIC的CC50均大于400μM；且在HepG2-NTCP、HepAD38和HepG2等3种细胞中CC50大于800μM，以上结果说明DIC的细胞毒性较小（图1.2）。图1.2MTT实验检测DIC对细胞活性的影响Figure1.2EffectsofDIConcellviabilityweredeterminedbyMTTassay.2.2Dicoumarol对HBx表达的影响2.2.1Dicoumarol对外源性HBx表达的影响为了进一步探究DIC对HBx表达的影响，我们接下来在HepG2细胞中分别转染了3×Flag-HBx和2×HA-HBx后，采用不同浓度的DIC处理，westernblot检测HBx蛋白水平发现，DIC可显著抑制外源性HBx蛋白的表达（图1.3）。图1.3Westernblot检测DIC对外源性HBx表达的影响Figure1.3TheeffectofDIContheexpressionlevelofexogenousHBxwasdeterminedbyusingwesternblot.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inactivated Sendai Virus Induces ROS-dependent Apoptosis and Autophagy in Human Prostate Cancer Cells[J]. QIAN Miao,TAN Hai Ming,YU Ning,WANG Tao,ZHANG Quan. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(04)
[2]Hepatitis B surface antigen clearance in inactive hepatitis B surface antigen carriers treated with peginterferon alfa-2a[J]. Ming-Hui Li,Yao Xie,Lu Zhang,Yao Lu,Ge Shen,Shu-Ling Wu,Min Chang,Cai-Qin Mu,Lei-Ping Hu,Wen-Hao Hua,Shu-Jing Song,Shu-Feng Zhang,Jun Cheng,Dao-Zhen Xu. World Journal of Hepatology. 2016(15)
[3]Overview of hepatitis B virus mutations and their implications in the management of infection[J]. Patrizia Caligiuri,Rita Cerruti,Giancarlo Icardi,Bianca Bruzzone. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[4]Hepatitis B viral load affects prognosis of hepatocellular carcinoma[J]. Su Jong Yu,Yoon Jun Kim. World Journal of Gastroenterology. 2014(34)
[5]HBV cccDNA in patients’ sera as an indicator for HBV reactivation and an early signal of liver damage[J]. Johnny Sze. World Journal of Gastroenterology. 2004(01)
本文编号：3335659
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