类组蛋白StpA对大肠杆菌I-E型CRISPR-Cas系统调控机制研究

发布时间：2024-02-26 04:56

　　为了适应外界压力,细菌或古菌往往会通过水平转移的方式获取外源基因。与此同时,细菌或古菌也需要防止外源有害基因入侵,为此,它们进化出了CRISPR-Cas系统介导的适应性免疫机制。CRISPR-Cas系统可以特异性高效地切割外源侵入的DNA。目前对CRISPR-Cas系统作用机制的研究较为透彻,但对其调控机制的了解并不深入。文献报道大肠杆菌中存在I-E型CRISPR-Cas系统,类组蛋白H-NS抑制CRISPR-Cas系统,但其同源蛋白Stp A对大肠杆菌CRISPR-Cas系统的调控尚未有报道。本文主要探究Stp A对I-E型CRISPR-Cas系统的调控机制。首先,本论文建立了检测cas启动子活性的荧光报告体系和检测CRISPR-Cas系统切割靶标DNA功能的实验体系,发现在hns缺失的情况下Stp A可以激活cas启动子,促进cr RNA含量的增加,从而增强I-E型CRISPR-Cas系统切割靶标质粒的能力。其次,为了鉴定H-NS和Stp A在cas启动子上的结合位点,本论文通过突变预测的H-NS结合位点,证实H-NS的确通过与该位点结合抑制cas操纵子转录,Stp A通过结合H-...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1CRISPR-Cas系统Class1和Class2的结构图[24]

低常═ypeI、Ⅲ、Ⅳ）通过由多个与核酸酶结合的亚基组成的crRNA结合级联复合物；Class2系统（TypeⅡ、Ⅴ、Ⅵ）通过单个多域蛋白负责指导结合和靶向切割DNA[20]，见图1-1。在不同CRISPR-Cas系统中，负责适应过程的蛋白是高度保守的，所有系统均需要Cas1和C....

图1-2I-E型CRISPR-Cas系统结构示意图[26]

类组蛋白StpA对大肠杆菌I-E型CRISPR-Cas系统调控机制研究3I型CRISPR-Cas系统主要由CRISPR阵列和切割相关的蛋白组成。在大肠杆菌K12系列菌株中，存在-E型CRISPR-Cas系统。Ⅰ-E型CRISPR-Cas系统主要由CRISPR阵列和8个蛋白组成，其....

图1-3CRISPR-Cas系统的防御机制[39]

类组蛋白StpA对大肠杆菌I-E型CRISPR-Cas系统调控机制研究5图1-3CRISPR-Cas系统的防御机制[39]Figure1-3DefensemechanismoftheCRISPR-Cassystem[39]当CRISPR-Cas系统处于适应阶段时（见图1-4）[2....

图1-4外源DNA整合至间隔区的过程[42]

浙江工业大学硕士学位论文6图1-4外源DNA整合至间隔区的过程[42]Figure1-4IntegrationofforeignDNAintothespacer[42]适应阶段分为两种类型[43]：原始态适应（naveadaption）；始发态适应（primedadaption）....

本文编号：3911364