木薯EIL基因克隆和蛋白诱导表达及纯化

发布时间：2024-02-26 00:53

　　ETHYLENE INSENSITIVE3-LIKE (EIL)基因家族是乙烯信号通道重要的正调控因子,在乙烯信号传递过程中启动抗病相关基因表达参与植物免疫应答提高植物的抗性。为了研究EIL基因编码蛋白与下游靶基因特异性结合传递乙烯信号,是否参与木薯抗逆境胁迫的调控,本研究从木薯中克隆一个EIL同源基因,命名为MeEIL。分析MeEIL启动子所包含的各种功能元件,结果显示该启动子中含有G-box、W box和MYC等元件。对MeEIL基因的ORF分析结果表明该基因编码含621个氨基酸残基的蛋白质。使用同源重组的方法将MeEIL的CDS序列连接到蛋白表达载体pET32a上。SDS-PAGE检测表明在28℃和16℃都可成功诱导蛋白表达,且28℃诱导效果更佳,通过大量诱导蛋白表达并用His标签纯化试剂盒纯化,Western blot分析验证MeEIL蛋白被成功的诱导出来。

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【部分图文】：

图2MeEIL基因的氨基酸序列

图1MeEIL基因启动子顺式作用元件的分布1.3MeEIL克隆及表达载体pET32a-MeEIL构建

图4不同诱导温度下,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测pET32a-MeEIL重组蛋白的表达量

在诱导蛋白过程中每间隔1h测量一次OD600值，实验组和对照组每个都要设置3个重复，最后求出平均值并算出标准差。观察实验组pET32a-MeEIL重组载体和对照组pET32a空载体的大肠杆菌的生长情况，结果表示，在16℃和28℃诱导蛋白表达的全过程中，含有pET32a-MeEIL....

图3MeEIL克隆及表达载体pET32a-MeEIL构建

图4不同诱导温度下,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测pET32a-MeEIL重组蛋白的表达量图5不同诱导温度下大肠杆菌的生长

图5不同诱导温度下大肠杆菌的生长

图3MeEIL克隆及表达载体pET32a-MeEIL构建1.6MeEIL蛋白表达纯化及Westernblot分析

本文编号：3911092