小鼠支气管肺泡干细胞的分离、鉴定与三维培养体系的构建

发布时间：2024-02-23 17:47

　　目的:探讨C57BL6小鼠支气管肺泡干细胞(BASCSs)体外分离、鉴定及其三维培养体系的构建方法,为进一步研究BASCSs的相关特性奠定实验基础。方法:选用C57BL6成年雄鼠,完整分离肺组织,1×PBS灌洗后,经支气管分次灌注Elastase酶进行消化,以锐器切碎肺组织,加入DNA酶使细胞更好地分散开。用75μm细胞筛去除未消化的组织块,所得细胞悬液以荧光标记的CD31、CD34、CD45、SCA-1、 EpCAM抗体染色,流式细胞仪分选CD31^-CD34^-CD45^-SCA-1⁺EpCAM⁺细胞,细胞与Mlg2908细胞(小鼠肺成纤维细胞株)按(1×10³)∶(1×10⁶)的比例混合,以Matrigel为基质构建三维培养体系。结果:通过Elastase酶消化肺组织,每只成年小鼠可得到有核细胞总数(1.6～1.8)×10⁷个,流式细胞技术结果显示,CD34^- CD45^-

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 小鼠支气管干细胞的体外分离与鉴定[11-15]
        1.2.2 小鼠支气管干细胞的三维培养[12,16-17]
2 结果
    2.1 BASCs分离结果
    2.2 支气管肺泡干细胞培养结果
3 讨论
    3.1 关于消化方法的选择
    3.2 细胞分离技巧
    3.3 关于红细胞的去除
    3.4 细胞三维培养技巧



本文编号：3907735