AcMNPV侵染宿主细胞过程中Ac132的功能研究
发布时间：2024-01-01 08:19
杆状病毒是一类双链、环状、超螺旋的DNA病毒,拥有80 kb到180 kb的基因组,编码大约100-180种蛋白。杆状病毒被人类广泛研究,以苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)最为突出,具有安全杀虫剂的称号,但因其杀虫时间慢等局限性而不被大范围使用。因此,加强杆状病毒活性以及全面了解其基因组中重要基因的功能尤为关键,特别是结构基因,ac132是其中之一。AcMNPV中的ac132位于基因组中的第132个开放阅读框,ac132基因全长660bp,编码关键的结构蛋白。有研究表明ac132的敲除对病毒DNA的复制和晚期基因没有明显的影响,但对病毒的形态发生有影响,ac132敲除以后,病毒发生基质(VS区)中出现包含单个核衣壳的卷毛状结构,基本不出现正常的棒状核衣壳,病毒发生基质出现的时间延迟。但是Ac132蛋白对子代病毒增殖的影响尚不明确,因此我们针对Ac132蛋白在AcMNPV侵染宿主细胞过程中的功能展开研究。本研究主要分为三部分内容:第一部分:重组杆状病毒AcMNP...
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒概述
1.1.1 杆状病毒简介
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的侵染周期
1.1.4 杆状病毒的结构蛋白
1.1.5 λ-Red同源重组及其在杆状病毒中的应用
1.1.6 杆状病毒载体表达系统
1.1.7 病毒侵染宿主的研究进展
1.2 杆状病毒Ac MNPV的基因:ac132
1.2.1 ac132概述
1.2.2 Ac132的相关研究
1.3 杆状病毒与宿主肌动蛋白
1.3.1 杆状病毒侵染与宿主肌动蛋白
1.3.2 杆状病毒运输与宿主肌动蛋白
1.4 杆状病毒侵染与宿主细胞能量代谢
1.5 杆状病毒的发展前景
1.6 论文的设计思路
1.6.1 研究内容与意义
1.6.2 研究方法及流程
1.6.3 实验流程
1.6.4 研究创新点
第二章 重组杆状病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建及Ac132-EGFP的表达分析
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要实验仪器
2.2.2 主要试剂及其配置
2.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP和AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP的构建
2.3.2 重组病毒Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建
2.3.3 Sf9细胞的培养、复苏、传代及冻存
2.3.4 重组杆粒转染Sf9细胞
2.3.5 噬斑法测定重组病毒的滴度
2.3.6 Western blot及荧光显微镜观察分析Ac132-EGFP的表达量
2.4 实验结果
2.4.1 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP的构建
2.4.2 重组病毒AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP的构建
2.4.3 重组病毒Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建
2.4.4 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的获得
2.4.5 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的滴度
2.4.6 荧光显微镜和Western blot检测Ac132-EGFP在Sf9细胞中的表达水平
2.5 讨论
第三章 Ac132在AcMNPV侵染宿主细胞过程中的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要实验仪器
3.2.2 主要试剂及其配制
3.2.3 载体、菌株、细胞、病毒
3.3 实验方法
3.3.1 Sf9细胞的培养
3.3.2 Western blot检测Ac132-EGFP在细胞核中的积累
3.3.3 Ac132蛋白的核定位信号序列预测分析
3.3.4 重组突变型病毒的构建
3.3.5 重组突变型杆粒转染Sf9细胞
3.3.6 噬斑法测定重组突变型病毒的滴度
3.3.7 噬斑法检测重组病毒子代病毒的增殖
3.3.8 荧光显微镜观察重组病毒对F-actin进和出细胞核的影响
3.3.9 Western blot检测重组病毒对 β-actin在细胞核内的聚集
3.4 实验结果
3.4.1 AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP侵染Sf9细胞中Ac132-EGFP在细胞核的积累
3.4.2 突变病毒AcMNPVac132ko-Ac132PPKK25-28AAAA-EGFP的构建
3.4.3 突变病毒Ac MNPV-Ac132PPKK25-28AAAA-EGFP的构建
3.4.4 重组突变病毒的获得
3.4.5 重组突变病毒的滴度
3.4.6 各种重组病毒子代病毒增殖的分析
3.4.7 荧光显微镜观察各种重组病毒对F-actin进和出细胞核的影响
3.4.8 Western blot分析各种重组病毒对 β-actin在细胞核中的聚集
3.5 讨论
第四章 重组杆状病毒对宿主细胞能量代谢的影响
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要实验仪器
4.2.2 主要试剂及其配置
4.2.3 细胞、病毒
4.3 实验方法
4.3.1 Sf9细胞的培养
4.3.2 细胞种板
4.3.3 病毒侵染
4.3.4 葡萄糖浓度的测定
4.3.5 乳酸浓度的测定
4.4 结果
4.4.1 各种重组病毒侵染Sf9细胞对宿主消耗葡萄糖的影响
4.4.2 各种重组病毒侵染Sf9细胞对宿主积累乳酸的影响
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3876453
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒概述
1.1.1 杆状病毒简介
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的侵染周期
1.1.4 杆状病毒的结构蛋白
1.1.5 λ-Red同源重组及其在杆状病毒中的应用
1.1.6 杆状病毒载体表达系统
1.1.7 病毒侵染宿主的研究进展
1.2 杆状病毒Ac MNPV的基因:ac132
1.2.1 ac132概述
1.2.2 Ac132的相关研究
1.3 杆状病毒与宿主肌动蛋白
1.3.1 杆状病毒侵染与宿主肌动蛋白
1.3.2 杆状病毒运输与宿主肌动蛋白
1.4 杆状病毒侵染与宿主细胞能量代谢
1.5 杆状病毒的发展前景
1.6 论文的设计思路
1.6.1 研究内容与意义
1.6.2 研究方法及流程
1.6.3 实验流程
1.6.4 研究创新点
第二章 重组杆状病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建及Ac132-EGFP的表达分析
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要实验仪器
2.2.2 主要试剂及其配置
2.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP和AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP的构建
2.3.2 重组病毒Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建
2.3.3 Sf9细胞的培养、复苏、传代及冻存
2.3.4 重组杆粒转染Sf9细胞
2.3.5 噬斑法测定重组病毒的滴度
2.3.6 Western blot及荧光显微镜观察分析Ac132-EGFP的表达量
2.4 实验结果
2.4.1 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP的构建
2.4.2 重组病毒AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP的构建
2.4.3 重组病毒Ac MNPV-Ac132-EGFP的构建
2.4.4 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的获得
2.4.5 重组病毒AcMNPVac132ko-EGFP、AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP的滴度
2.4.6 荧光显微镜和Western blot检测Ac132-EGFP在Sf9细胞中的表达水平
2.5 讨论
第三章 Ac132在AcMNPV侵染宿主细胞过程中的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要实验仪器
3.2.2 主要试剂及其配制
3.2.3 载体、菌株、细胞、病毒
3.3 实验方法
3.3.1 Sf9细胞的培养
3.3.2 Western blot检测Ac132-EGFP在细胞核中的积累
3.3.3 Ac132蛋白的核定位信号序列预测分析
3.3.4 重组突变型病毒的构建
3.3.5 重组突变型杆粒转染Sf9细胞
3.3.6 噬斑法测定重组突变型病毒的滴度
3.3.7 噬斑法检测重组病毒子代病毒的增殖
3.3.8 荧光显微镜观察重组病毒对F-actin进和出细胞核的影响
3.3.9 Western blot检测重组病毒对 β-actin在细胞核内的聚集
3.4 实验结果
3.4.1 AcMNPVac132ko-Ac132-EGFP和Ac MNPV-Ac132-EGFP侵染Sf9细胞中Ac132-EGFP在细胞核的积累
3.4.2 突变病毒AcMNPVac132ko-Ac132PPKK25-28AAAA-EGFP的构建
3.4.3 突变病毒Ac MNPV-Ac132PPKK25-28AAAA-EGFP的构建
3.4.4 重组突变病毒的获得
3.4.5 重组突变病毒的滴度
3.4.6 各种重组病毒子代病毒增殖的分析
3.4.7 荧光显微镜观察各种重组病毒对F-actin进和出细胞核的影响
3.4.8 Western blot分析各种重组病毒对 β-actin在细胞核中的聚集
3.5 讨论
第四章 重组杆状病毒对宿主细胞能量代谢的影响
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要实验仪器
4.2.2 主要试剂及其配置
4.2.3 细胞、病毒
4.3 实验方法
4.3.1 Sf9细胞的培养
4.3.2 细胞种板
4.3.3 病毒侵染
4.3.4 葡萄糖浓度的测定
4.3.5 乳酸浓度的测定
4.4 结果
4.4.1 各种重组病毒侵染Sf9细胞对宿主消耗葡萄糖的影响
4.4.2 各种重组病毒侵染Sf9细胞对宿主积累乳酸的影响
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3876453
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