利用滚环扩增鉴别同源家族miRNAs

发布时间：2023-12-11 20:47

　　滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)是一种基于病毒DNA复制而发明的新技术。近些年,RCA技术已经被广泛应用于微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)的检测。在miRNA检测研究领域中,鉴别高度同源的家族miRNAs成为该研究领域的瓶颈。本研究引入新型的RCA技术来增加鉴别的灵敏度和特异性,进一步提高家族miRNA鉴别的灵敏度,滚环扩增的程度用相对荧光强度来表示。研究结果显示,T4 RNA连接酶2可在RCA的环化过程中实现最大的环化效率,从而提高RCA的检测特异性。本文利用优化的RCA技术,实现对let 7高度同源的家族miRNAs高灵敏度的鉴别,灵敏度可达5 fmol。let 7a的滚环探针对Let 7a这一miRNA扩增后的相对荧光强度为1 550,而对其他的家族miRNA相对荧光强度仅为260。其他的家族miRNA探针在鉴别时相对荧光强度也显示了较大的差异。而依靠传统的RT-qPCR方法的鉴别灵敏度是4 pmol,与本研究相比,灵敏度低了近1 000倍。本研究的结果表明,利用RCA技术鉴别高度同源性miRNA...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 寡核酸序列
        1.1.2 试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 滚环扩增检测
    1.3 环化
    1.4 滚环扩增
    1.5 实时定量PCR检测miRNAs
    1.6 统计学方法
2 结果
    2.1 RCA方法实现鉴别家族miRNA
        2.1.1 Let 7a的鉴别
        2.1.2 let 7b、let 7c、let 7 d、let 7e的鉴别
    2.2 RCA鉴别let 7a的高灵敏度
3 讨论
    3.1 RCA技术的检测应用
    3.2 利用RCA方法鉴别let 7家族miRNAs
    3.3 重要研究结果
        3.3.1 SYBR GreenⅡ荧光检测
        3.3.2 应用滚环扩增反应检测微小RNA(miRNA)
        3.3.3 利用滚环扩增方法鉴别高度同源的miRNAs



本文编号：3873343