GoldenBraid酶切连接反应体系的优化

发布时间：2023-10-26 19:43

　　旨在获得更为高效稳定的GoldenBraid(GB)酶切连接组装反应体系。通过优化GB反应中酶切时间、缓冲体系、限制性内切酶和底物配伍来提高有效克隆的效率,确定最佳反应体系。结果显示,4 min酶切时间,1 μL FastDigest Buffer(10×)缓冲体系,1 mmol/L ATP,0.5 μL FastDigest Esp3I 或FastDigest Eco31I,元件供体载体与受体载体的摩尔比3∶1时,有效克隆比例接近99%,是优化前(BsmBI 8%、BsaI 23%)的4倍以上,此时酶切连接效率接近100%。与原始方案相比,通过体系的优化,可以在更少内切酶用量(原方案为1 μL)的情况下,显著提高有效克隆比例,表明本方法能提高GB系统的酶切连接效率和实用性。

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 酶和试剂
    1.2 方法
        1.2.1 限制连接组装反应
        1.2.2 GB反应产物的转化
        1.2.3 GB反应评价方法
        1.2.4 GB反应优化实验
            1.2.4.1 酶切时间对GB反应的影响
            1.2.4.2 缓冲体系对GB反应的影响
            1.2.4.3 限制性内切酶对GB反应的影响
            1.2.4.4 底物配伍对GB反应的影响
2 结果
    2.1 酶切时间对酶切连接效率的影响
    2.2 缓冲体系对酶切连接效率的影响
    2.3 不同来源限制性内切酶对酶切连接效率的影响
    2.4 底物配伍对酶切连接效率的影响
3 讨论
4 结论



本文编号：3856864