小鼠CYP2J5基因组织差异表达及蛋白质结构与功能分析

发布时间：2022-11-12 17:35

　　为探讨小鼠CYP2J5的结构特征及生物学功能,首先通过实时荧光定量PCR分析了小鼠CYP2J5基因组织差异表达,然后采用生物信息学工具进行了CYP2J5蛋白质结构与功能的预测和分析;为进一步探索和验证CYP2J5生物学功能及对脂代谢和性激素合成的影响,基于基因工程技术构建CYP2J5基因的超表达载体,并通过Western Blot确认构建的载体能正确表达CYP2J5基因。最终将构建的CYP2J5超表达载体导入小鼠TM3细胞,通过qPCR分析了脂代谢和性激素合成相关基因表达。结果显示,小鼠CYP2J5基因在肝脏和肾脏中高水平表达,该基因属可溶性胞质蛋白质,蛋白质二、三级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,有信号肽存在并在第13～35及75～97个氨基酸之间存在跨膜区,其主要功能是参与细胞脂代谢和脂肪酸代谢等生物调节过程。在TM3细胞中超表达CYP2J5基因后,脂代谢与性激素通路关键基因有显著变化。结果为CYP2J5基因功能的研究与开发利用提供了生物信息学和分子生物学方面的基础数据。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 供试动物
        1.1.2 主要试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 CYP2J5基因组织差异表达
        1.2.2 生物信息学分析
        1.2.3 引物设计与合成
        1.2.4 CYP2J5基因扩增和克隆
        1.2.5 真核超表达载体的构建
        1.2.6 重组载体表达分析
        1.2.7 脂代谢与性激素通路基因检测
2 结果与分析
    2.1 小鼠不同组织中CYP2J5表达水平
    2.2 生物信息学分析
        2.2.1 理化性质分析
        2.2.2 疏水性分析
        2.2.3 信号肽及跨膜信号分析
        2.2.4 亚细胞定位分析
        2.2.5 分子功能预测分析
        2.2.6 结构预测
    2.3 Overlap-PCR扩增CYP2J5基因与TA克隆
    2.4 CYP2J5真核超表达载体构建
    2.5 超表达载体表达分析
    2.6 脂代谢与性激素相关基因检测
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]酵母双杂交筛选与小鼠维生素D受体互作的蛋白[J]. 张涛,白皓,王令,路宏朝,杜伟立,刘欢,杨理凯.  西北农业学报. 2018(09)
[2]CYP2J2及EETs通过抗氧化应激和抗凋亡减轻肺缺血再灌注损伤[J]. 陈文树,郑冠英,平伟,付向宁,张霓,王家宁.  华中科技大学学报(医学版). 2018(01)

博士论文
[1]CYP表氧化酶2J2及其代谢产物EETs调节巨噬细胞极化改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗[D]. 戴梅艳.华中科技大学 2016

硕士论文
[1]麦冬皂苷D通过CYP2J3/EETs系统发挥心肌保护作用的分子机制研究[D]. 油文亭.安徽医科大学 2016



本文编号：3706788