重组酪氨酸脱羧酶的可溶性表达及合成酪胺的研究

发布时间：2024-04-10 03:45

　　酪胺及其衍生物是合成具有多种生理药理学活性成分的重要中间体,广泛应用于药品、保健品和化妆品行业。酪氨酸脱羧酶(Tyrosine decarboxylase,Tyr DC)可以催化酪氨酸的羧基去除反应生成酪胺。利用Tyr DC合成酪胺工艺简单、效率高、绿色环保,是具有巨大潜力的酪胺合成途径之一。本研究对短乳杆菌(Lactobacillus brevis)来源Tyr DC重组表达的包涵体问题进行探究发现:(1)向LB培养基中添加葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和甘露糖能够有效提高重组Tyr DC可溶性表达水平;(2)重组Tyr DC的可溶性表达和包涵体形成是相对独立的,酸性p H能够促进其可溶性表达,而葡萄糖、果糖或阿拉伯糖对减少包涵体不可或缺;基于以上结果,通过向LB培养基中添加葡萄糖(10 g·L–1,LBG培养基)和控制p H 6.50–6.80的策略获得的可溶性Tyr DC,与在LB培养基中仅控制p H 6.50–6.80的策略相比,Tyr DC在LBG和LB中的发酵液酶活力分别为30.70和22.00 k U·L–1,提高了1.40倍;其冻干酶粉的活力分别是46.30和12.60 U·mg...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3-1IPTG对TyrDC可溶性表达（A）和酶活力（B）的影响

组TyrDC可溶性表达及其包涵体形成原诱导剂IPTG和葡萄糖对TyrDC可溶性表达的诱导剂IPTG对TyrDC表达的影响前期研究中发现，向LB培养基中添加1%葡萄成，同时促进其可溶性表达。我们推测由于葡效应，能够降低重组蛋白表达水平，有利于Ty低诱导....

图3-2葡萄糖对TyrDC可溶性表达（A）和酶活力（B）的影响

江南大学硕士文论可溶部分较1g·L-1时显著减少，且基本没有包涵体。，包涵体的减少和可溶性的增加是同步的，意味着葡进TyrDC的可溶性表达，又能降低其包涵体形成。从图3-2（B）酶活力角度看，在含0–2.50g·L–1葡萄相对活力增加较为明显；在葡萄糖浓度为2.50–....

图3-8添加不同碳源条件下分子伴侣的定量PCR结果

pH对大肠杆菌的生长有重要影响，而pH的变化取合物的利用情况，更容易利用的如葡萄糖则消耗量较多，pH下露糖则残糖量较高，pH下降很慢，而后开始上升；而不被利用的。同分子伴侣对重组TyrDC可溶性表达的影响文献报道，在大肠杆菌中分子伴侣负责蛋白的正确折叠，包括Gro....

图3-15全质粒PCR（A）和菌落PCR（B）的电泳图分析

3-15全质粒PCR（A）和菌落PCR（B）的电泳图分析ysisofgelelectrophoresisbywholeplasmidPCR(A)andcolon：H98A,M99A,N100A,S101A,E102A,G296F,S297G,....

本文编号：3950097