苹果Mdsolo-LTR1及其缺失片段的组织特异性表达活性分析

发布时间：2024-04-16 05:37

　　苹果(Malus×domestica Borkh.)属于蔷薇科(Rosaceae)苹果属(Malus Mill.),富含转座子等促进基因组进化的转座元件。前期研究表明“元帅”短枝变异品种“华帅1号”、“奥勒冈矮生”、“玫瑰红”、“矮红”、“居家店矮生”四号染色体上存在一特异的长度为2190 bp的solo-LTR(命名为Mdsolo-LTR1),进一步分析发现Mdsolo-LTR1插入在另一个solo-LTR(命名为Mdsolo-LTR2,长度为1536 bp)内;Mdsolo-LTR1在茎中特异表达,具有双向启动功能;Mdsolo-LTR2正、反义链没有明显的启动子活性。Blast比对结果发现梨基因组存在一长度约1000 bp与Mdsolo-LTR1的810 bp-1807 bp高度相似的序列,将其正、反义链分别命名为PEAR-1-正和PEAR-1-反。本研究在PlantCARE软件分析Mdsolo-LTR1正、反义链基础上,利用启动子缺失突变的方法将Mdsolo-LTR1正、反义链分割成不同的片段,借助烟草瞬时表达和异源转化方法分析Mdsolo-LTR1正、反义链不同缺失片段、Md...

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图3-1Mdsolo-LTR1及其缺失序列载体构建示意图

pBI121::GFP菌液受赠于安徽农业大学生物科技楼256温波老师实验室。Mdsolo-LTR1-EHA105菌液为韩梦雪师姐保存在-80℃冰箱。3.1.2试验方法3.1.2.1Mdsolo-LTR1调控元件分析将Mdsolo-LTR1的2190-bp提交....

图3-2Mdsolo-LTR1正义链5’端及Mdsolo-LTR1反义链3’端缺失突变表达载体构建示意图

图3-2Mdsolo-LTR1正义链5’端及Mdsolo-LTR1反义链3’端缺失突变表达载体构建示意图Fig.3-2Constructionofthedeletionmutantexpressionvectorforthe5'endof....

图3-3Mdsolo-LTR1正义链5’端缺失突变（dF1-dF10）表达载体构建示意图

GFP加接头-dF10CCGGGGATCCTCTAGATGATGTGGAAAATAAGTTAACACACAAAATTAAACatggtgagcaagggcdF1~dF10上游引物dF1GTCACATATTTGGAACCAAGGTdF2TCATCCTTGTCCCCTAAA....

图3-4Mdsolo-LTR1和梨基因组比对示意图

将扩增的PCR产物送南京擎科（TSINCKE）测序部测序，分析序列。3.2.2.4GUS基因表达活性定量检测同3.1.2.7。3.3梨PEAR-1-正和PEAR-1-反表达载体构建及转化3.3.1试验材料“砀山酥梨”叶片。拟南芥Columbia（“Col-0”....

本文编号：3956531