MYB/ERF级联效应和WRKY/ERF复合体参与柿果实采后脱涩

发布时间：2024-02-18 18:38

　　柿(Diospyros kaki)一般分为涩柿和甜柿,主栽品种多为涩柿,采后须经人工脱涩后才能食用。本文以4个涩柿品种(’磨盘柿’、’镜面柿’、‘刀根早生’、’恭城水柿’)为材料,通过采后AHCA处理(95%CO2+1%O2,常称为高CO2处理)脱涩,利用RNA-seq数据分析和DkPDC2(关键靶标基因之一)启动子筛库实验,鉴别了介入柿果实采后脱涩的转录因子,并解析它们的作用机制,进一步丰富柿果实采后脱涩的转录调控机制。主要结果如下:1.基于转录组,发现了参与柿果实采后脱涩的DkMYB/DkERF转录级联效应。研究发现AHCA处理能够诱导柿果实乙醇乙醛的积累,进而导致可溶性单宁含量的降低,实现柿果实脱涩。通过RNA-seq筛选并通过实时定量PCR验证得到柿果实采后脱涩过程中9个受AHCA处理诱导表达的转录因子,进一步通过双荧光素酶体系和酵母单杂交以及点突变技术,发现DkMYB10可以直接结合DkERF9启动子并诱导其活性,DkERF21和DkERF22可以间接激活DkERF10启动子活性,DkERF18、DkERL19和DkMYB6可以直接结合DkERF19启动子并激活其活性,果实圆...

【文章页数】：86 页

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【部分图文】：

图２．１?ＡＨＣＡ处理对‘磨盘柿’果实采后脱涩的影响（２０?°Ｃ）??（Ａ）单宁印迹分析，颜色越深表明可溶性单宁含量越高；（Ｂ）可溶性单宁含量；（Ｃ）乙醛??

ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?Ｓ．Ｅ．ｓ?ｆｒｏｍ?ｔｈｒｅｅ?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．??约为６５８倍和４８９倍。在‘刀根早生’中，同样只有Ｄ妨表达受到强烈诱??导，Ｉｄ时达到了?９３５倍（图２．２）。与之相反，其余５个转录因子的表达并不能??被ＡＨＣＡ处理显著诱导（....

图２．３?ＡＨＣＡ响应转录因子对和ＺＭＰＤＣ２启动子的调控效应??将空载体和启动子混合的ＬＵＣ／ＲＥＮ设为１，误差线代表５次生物学重复??

因子的ＳＫ表达载体构建，在烟草中开展了对和￡）ｙｔＰＺＸ：２启动子的双??荧光素酶检测试验。结果表明，９个转录因子对和尸ＤＣ２启动子均??无明显的调控作用（ＬＵＣ／ＲＥＮ＜２．０）（图２．３）。??３ｉ???＋ＤｋＡＤＨ?１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??２????—?Ｉ??ｉ?１?＿?ｎ....

图２．４瓜￡：及Ｆ９和对ＺＭＰＺＪＣ２启动子的协同增效效应??ＬＵＣ／ＲＥＮＩ，代５

调控ＤｋＥＲＦ９启动子活性（约２Ｊ倍）；ＤｋＥＲＦ２！和Ｄｋ￡ＲＦ２２能诱导Ｄｋ￡ＲＦ！０??启动子活性（分别约为２．３和２．０倍），而Ｄ狀和以及能??够转录调控启动子活性（分别约为２．１、２．２和３．７倍）（图２．５）。进一??步分祈?ＤｋＥＲＦ２１?和?ＤｋＥＲＦ２２?对?Ｄ....

图２．５?ＡＨＣＡ响应转录因子对ＺＷ正／？Ｆ９／／ｆｔ／／９启动子的调控效应??和／＾Ａ／ｒａ５４分别由Ｍｉｎ等（２０１２）和Ｆａｎｇ等（２０１６）克隆和构建载体

过酵母单杂交体系发现ＤｋＭＹＢｌＯ可以直接结合启动子序列，而不能结??合元件（ＭＢＳＩＩ元件ＡＣＣＡＡＣ，突变为ＴＣＣＴＴＣ）突变后的启动子??序列（图２．６Ａ）；烟草双荧光素酶体系研究发现，ＤＭ／７Ｂ川对点突变??２３??

本文编号：3902348